实验三基因的PCR扩增技术.pptx

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基因的PCR扩增技术
一、实验目的
学****PCR反应的基本原理与实验技术
从BCG基因组DNA中PCR扩增Rv1791(PE19)基因
二、基本原理
PCR类似于DNA的天然复制过程。
将待扩增的DN***段与其两侧互补的两段寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增倍数可达2n倍。
体内DNA的复制
DNA聚合酶
dNTP
解旋酶类
引物
5’
3’
加热
变性
复性
复温
DNA的变性和复性
加热或强酸、碱性作用可以使DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为DNA的变性。
解除变性的条件后,变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性,也叫退火。
PCR扩增原理
引物
延伸
延伸
5’
5’
3’
3’
变性、退火
变性、退火
总体积25-100l
Buffer缓冲液
dNTP原料
Primer引物
DNA分子模板
Taq酶DNA聚合酶
1反应体系
三、实验材料
BCG基因组DNA
10PCR反应缓冲液、4dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA、引物(P1、P2)、超纯水SW
PCR反应管、移液器、PCR仪、离心机
四、实验步骤
引物设计
准备PCR反应溶液
PCR扩增反应
结果检测
Rv1791-F:ATGAATTCAGGAAGACAGCATGTCGTTC(EcoRI)
Rv1791-R:
ATCTCGAGTGTTCCCCCTCTCCTTCAG
(XhoI)