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高压、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世,导致高效液相色谱法(high-performanceliquidchromatography,HPLC)的产生。
薄壳型填料,柱效仅每米1000~3000塔板数
5~10μm球型和无定型微粒硅胶,每米5~6万理论塔板数
高度均匀甚至单分散1~3μm硅胶基质球形填料,达15~30万理论塔板/m。
新型分离模式和方法不断增加
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高效液相色谱法的产生和发展
高压、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世,导致高效液相色谱法(high-performanceliquidchromatography,HPLC)的产生。
薄壳型填料,柱效仅每米1000~3000塔板数
5~10μm球型和无定型微粒硅胶,每米5~6万理论塔板数
高度均匀甚至单分散1~3μm硅胶基质球形填料,达15~30万理论塔板/m。
新型分离模式和方法不断增加
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基本特点
、高速、高灵敏度
操作条件
适用范围广
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(adsorptionChromatography)
(partitionChromatography)
(ion-ExchangeChromatography)
(sizeExclusionChromatography)
需要指出的是每种色谱方法通常存在一种起支配作用的主要保留机理,但可能还存在次要的其他机理。
根据固定相和液体流动相相对极性的差别,有正相色谱和反相色谱两种色谱体系或方法。
反相色谱和正相色谱主要区别是流动相和固定相的相对极性,最初形成于液液分配色谱,现已广泛应用于其他各种色谱方法。
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上述每种色谱类型均可进一步分为多个不同色谱方法。这些方法可用于分析分离,也可用于制备分离,各色谱方法在相关领域应用互相补充。
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现代高效液相色谱使用3~10μm柱填料,为达到适用的流动相流速,高压泵需提供几十MPa或数百大气压力的柱前压。因而HPLC仪器比其他类型的色谱仪要复杂和昂贵。
1,2,3,--流动相溶剂储器;4,5,6,--过滤器;7—溶剂比例调节阀和混合室;8—输液泵;9—脉动阻尼器;10—放空阀;11—过滤器;12—反压控制器;13—进样阀;14—色谱柱;15—检测器。
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现代高效液相色谱仪配备一或多个流动相储液器,一般为玻璃瓶,亦可为耐腐蚀的不锈钢、氟塑料或聚醚醚酮(PEEK)特种塑料制成的容器。每个储瓶容积500~2000mL。储液瓶位置要高于泵体,以保持一定的输液静压差,在泵启动时易于让残留在溶剂和泵体中微量气体通过放空阀排出。
储器常装有脱除溶剂中溶解的氧、氮等气体装置,这些溶解气可能形成气泡引起谱带展宽,并干扰检测器正常工作。溶剂脱气主要有两种方法,其一是搅拌下真空或超声波脱气;另一种是通入氦或氮等惰性气体带出溶解在溶剂中空气。储液器的溶剂导管入口处装有过滤器,以进一步除去溶剂中灰尘或微粒残渣,防止损坏泵、进样阀或堵塞色谱柱。
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通用HPLC仪输液泵系统的基本要求是:提供(50-500)×105Pa的柱前液压;输出无脉动恒定的液流;-10mL/min;%或更好;系统组件耐腐蚀(密封性良好的不锈钢或氟塑料)。高压泵产生的液体高压没有爆炸危险,因为液体的压缩性极小。最重要的是系统密封性能好。
目前常使用的有三种类型的输液泵,即往复柱塞泵、气动放大泵、螺旋注射泵,它们各有优、缺点。
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气动放大泵又称为恒压泵,其工作原理与水压机相似,以低压气体作用在大面积气缸活塞上,压力传递到小面积液缸活塞,利用压力放大获得高压。
螺旋注射泵又称为排代泵,其结构类似于医用注射器,由一个大体积液体室和柱塞组成,步进电机通过螺旋杆传动机构推动柱塞输出高压液体。
比例调节阀和混合器;脉动阻尼器;放空阀;过滤器;反压控制传感器等。
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