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临床药理研究所
细胞分离与培养技术
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当代生物技术
基因工程技术
细胞工程技术
酶工程技术
发酵工程技术
细胞培养
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细胞分离技术
从血液、体液中分离细胞
从原代组织中分离细胞
从原培养容器中分离细胞--传代培养
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原代培养
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
采血方法:
人静脉穿刺、耳垂或手指针刺采血;
小动物(大鼠、小鼠)剪尾法、眼眶采血、心脏穿刺法、断颈取血或股动脉放血。
兔耳静脉或动脉穿刺取血。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
血液抗凝方法:
肝素法:-(即5%肝素溶液2-4µl);
草酸盐法:,,加双蒸水10ml溶解后,,使其干燥。若采取5ml以下血液可直接注入此试管中,轻轻摇摆;
枸橼酸钠法:先配制2%枸橼酸钠,-;
EDTA法():µl。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
体液标本采集:
在局部70%酒精消毒灭菌后,用灭菌注射器穿刺入体腔(如胸腔,腹腔,关节腔等)抽取液体样品。
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膝关节腔穿刺
胸腔穿刺
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
血样中红细胞和白细胞分离:
利用细胞相对密度或大小不一样而沉降速度不一样原理,以自然沉降法结合不一样速度离心沉降法将不一样细胞分离。
抗凝血,室温或37℃下直立静置30-60min,红细胞沉降至下层,中间乳白色薄膜层为白细胞及血小板,上层为淡黄色血浆。也可将抗凝血与3%明胶(经灭菌消毒)等量或3︰l量混合于离心管中,直立静置30-60min,红细胞沉于管底,上层乳白色混浊液含白细胞。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
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血中单个核细胞分离:
单个核细胞包含淋巴细胞和单核细胞,-,采取速度沉降法原理使其分离。
淋巴细胞分离液
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
血中单核细胞分离:
利用细胞在培养过程中贴壁时间早晚不一样进行细胞分离
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单个核细胞悬液
多将悬液放入12cm直径培养皿中,于37℃培养箱中静置30-60min。此时单核细胞贴壁,而淋巴细胞还未贴壁,倾出未贴壁细胞,并用Hanks液轻轻冲洗培养皿以尽可能洗下未贴壁细胞(淋巴细胞)。
用Hanks液强力冲洗吹打与震荡,将贴壁单核细胞冲落或用刮刀轻刮,搜集贴壁单核细胞。
计数后分别制备所需浓度细胞悬液。
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细胞分离技术--从血液、体液中分离细胞
黏附法分离血中单核细胞、T,B淋巴细胞
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因B淋巴细胞和单核细胞能黏附于尼龙纤维柱上(聚酰胺纤维柱),所以可将其与T淋巴细胞分离。
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