文档介绍：——蛋白质的透析
透析实验
实验原理
透析是膜技术的一种,利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子,从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。
常见的透析有:蛋白质的透析和糖类的透析。
实验原理
透析是利用半透膜进行的一种选择性扩散操作,通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
实验原理
把需要透析的样品盛于透析袋内,袋内留有挤去空气的空余部分,以防由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破
为了获得较快的透析速度,常常采取一些措施保持膜两侧浓度差具有最大差,如经常更换透析外液,连续搅动外液
实验原理
透析外液尽量不用纯水,常使用一定pH的低盐缓冲液,这样可以避免袋内样品pH的变化和过分地稀释
透析袋出厂时都用10%的甘油处理过,并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质,它们对蛋白质和其它生物活性物质有害,用前必须除去
实验原理
透析袋的处理:一般是将透析袋剪成10~20cm的小段,在2%(W/V)NaHCO3和1mmol/L的EDTA()中煮沸10min,用蒸馏水彻底洗尽透析袋,然后放在1mmol/L的EDTA()中煮沸10min,用蒸馏水彻底洗尽透析袋,冷却后,存放于4℃,从此时起取用透析袋,必须戴手套
检查透析效果的方法:用1% BaCl2检查(NH4)2SO4,用1%AgNO3检查NaCl、KCl等
透析装置
透析装置和透析过程示意图
实验仪器
磁力搅拌器
蛋白质的透析
取10~15mL蛋白质***化钠溶液,装入处理好的透析袋中,扎紧两端,浸入蒸馏水烧杯中进行1~2h的透析
用***银检测烧杯中透析液是否有***离子存在?用双缩脲法检测是否有蛋白质存在?
透析完全后,检测透析袋内是否存在蛋白质和***离子?
注意:透析完全时,透析袋内会出现球蛋白沉淀,因为球蛋白不溶于纯水。
思考题