文档介绍：中国农业大学
博士学位论文
鸡传染性法氏囊病病毒基因突变及缺失重组的研究
姓名:李仁茂
申请学位级别:博士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:张曼夫
20051201
摘要间质增宽;,《径玖Υ沃籋Ⅻ《径玖锨浚琒鸡致死率高达,法氏囊段共转染法氏囊原代细胞肁秆〕个突变的病毒,.:、Ⅷ、鸡传染性法氏囊病怯杉Υ拘苑ㄊ夏也〔《綢引起,是危害鸡的一种急性、高度接触性传染病。近年世界各地出现了超强毒它的毒力远大于经典毒株,但是这种毒力增强的分子基础尚不完全清楚。基因组包括段和诙危珹节段编码所有的结构蛋白、头墙峁沟白訴,诙伪嗦隦聚合酶。侵饕5乃拗鞅;ば钥乖⒂氩《径玖拖赴氖刃悦芮邢喙兀涠玖ο喙氐目制位点主要位于弑淝、坏陌被帷5ú煌局甑腣高变区对毒力控制的表现有较大的差别,有的毒株毒力不由弑淝刂疲得骰褂斜鸬那蚩刂啤是群特异性抗原,具有一定的免疫保护性,其羧基端与毒力有关,但是在不同的毒株表现怎样尚不得知探讨高变区和訧玖Φ挠跋欤疚牟捎萌诤螾,将超强毒一腁节段和诙胃髯缘谋嗦肭头潜嗦肭轪进行连接,得到全长的基因组。同时,为了转录的需要,在艘舳有蛄校朐靥錺一玫降腁节段克隆命名为瓾,诙蔚目寺∥猵..。在此基础上运用点突变将弑区的氨基酸位点同时突变,而对、氨基酸位点进行两点突变的组合,共得到龊兴ǖ阃槐渥楹系腁节段。采用介导的反向遗传技术将诙魏虰节縨ü鼵细胞培养实验和免疫荧光检测说明突变未能改变细胞的嗜性,而突变却都能改变细胞的嗜性,说明控制细胞的嗜性除由刂仆饣褂蠽。然后用相同滴度的病毒接种四周龄Γ舛ㄆ涠玖Γ峁⑾个突变病毒对χ滤缆屎头ㄊ囊病理变化有较大的差异。月病毒组毒力晟低,它不致死鸡。法氏囊病理变化也最轻微,仅坏死并严重萎缩。以上结果表明,弑淝、蚔的氨基酸位点是毒力控制的决定因素,但是刂贫玖Φ哪芰η坑赩高变区。另一方面,为了进一步说明超强毒株毒力增强和非编码区的关系,运用ń獺诙’非编码区兴呈饺笔Ш鸵约昂腿醵綾之间奶婊唬玫饺笔舳忧、舳雍虸、碱基的突变体和嵌合体,再次运用采用介导的反向遗传技术转染法氏囊原代细胞,用法筛选出鐾槐涞牟《荆分别命名为!,并通过免疫荧光得到了验证。随后用流式细胞计数仪进行重组病毒对赴蛲龅难芯俊=峁砻鳎刈椴《揪苡盏荚ㄊ夏蚁赴的凋亡,随着缺失长度的增加,病毒诱导细胞凋亡的能力也随之减弱笔罨睦,非编码区替换的病毒和野生病毒诱导细胞凋亡的能力没有差别。以上结果表明,.腁节段钠舳忧虸性銮肯赴魍龅哪芰Γ舳忧蚼区之间的区域可抑制细胞
缺失的病毒。②各点突变病毒的复制速率以,病毒的复制速率最高,/畹停桓鞲鐾凋亡。为了检测以鞲鲋刈椴《镜牟《靖粗扑俾剩辛硕縋检测病毒复制,结果表明①笔Ш吞婊坏闹刈椴《靖粗扑俾实陀谝吧局辏潜嗦肭暾牟《粗扑俾蚀笥变病毒的复制速率远低下野生毒株。关键词:传染性法氏囊病病毒;融合坏阃槐洌环聪蛞糯ḿ际酰籄幌赴刃裕欢力;非编码区:细胞凋亡;流式细胞计数仪;荧光定量怀彩絉
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缩略词一览表简称英文名Ⅵ中文名鸡传染性法氏囊病病鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株开放阅读框依赖腞聚合酶疤宓鞍基因组连接蛋白多聚蛋白非编码区病毒基因组连接蛋白末端反向重复系列无特定病原牛血清白蛋白细牧糆培养基鸡胚成纤维细胞二硫苏糖醇乙二氨四乙酸焦碳酸二乙酯双蒸水经处理的双蒸水十二烷基硫酸钠二甲基亚砜磷酸缓冲液三羟甲基氨基甲烷反转录程序性细胞死亡鸡胚法氏囊鸡多抗血清细胞病变效应单克隆抗体酶联免疫吸附测定抗原捕捉以单抗检测的.—猙狂.,.—猚’疭緄.—.。.
培绒毛尿囊膜免疫球蛋白四甲基联苯胺辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡点突变双点突变槐病毒取突变双突变疕替换.’那逗喜《碱基缺失的重组Ⅵ呙—“/月猙一.’
研究一。谷‘舻∽目髋髅轹奈:戈帆独创性声明关于论文使用授权的说明。辏孪θC艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:时间:年月日
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