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一实验目的
1、学****离体小肠平滑肌灌流的实验方法;
2、证明小肠平滑肌具有自动节律性和紧张性活动,观察若干刺激对离体小肠运动的影响。
二实验原理
动物的胃肠道由平滑肌组成,胃肠道平滑肌除具有肌肉的共性,如兴奋性、传导性和收缩性之外,尚有自己的特性,主要表现为紧张性和自动节律性收缩,可以形成多种形式的运动,主要有紧张性收缩,蠕动。此外,胃还有明显的容受性舒张,小肠还有分节运动及摆动。如果将动物的小肠平滑肌离体,放置在各种化学成分、渗透压、pH、温度以及气体供应等因子十分接近机体的内环境的溶液中时,可保持离体小肠段长时间地存活下来,并可以观察到小肠平滑肌的自动节律性、紧张收缩性、伸展性和对机械牵拉、温度刺激、化学刺激十分敏感,而对电刺激和切割刺激不敏感等一系列特性。通常用台式液做灌流液,将小肠的一端固定,另一端连张力换能器,即可通过一定的记录装置记录下小肠肌的收缩
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节律性收缩曲线,恢复供氧,待台氏液中的小肠稳定后,分别换成22℃,45℃的台氏液,记录肠段节律性收缩曲线。再灌流37℃台氏液待肠段活动恢复后,依次滴加1mol/LNaOH溶液,1mol/LHCl溶液,1%CaCl2溶液1:5000肾上腺素,1:10000乙酰胆碱,阿托品观察肠段收缩曲线的改变。每次实验在观察到明显变化后,都应用预先准备好的37℃台氏液冲洗3次。
五实验结果及分析
(1)缺氧对离体小肠活动的影响
从图一可以看出,正常情况下,离体家兔肠段收缩频率为17次/min,,最大值为35g。对浴槽内的离体小肠停氧的瞬间可以看到基线明显上移接着又下降回原来状态,其节律为16次/min,,。
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图一缺氧对离体小肠活动的影响()
分析:在缺氧情况下,家兔离体肠段收缩频率和强度都略有下降,但在缺氧瞬间上移的基线是小肠对生理需要的适应,故收缩有所加强但时间很短。从实验得到的数据可以说明,氧气也是影响小肠活动的因素,缺氧时对小肠收缩活动有抑制作用。
(2)低温对离体小肠活动的影响
离体小肠在适宜的温度下,其节律为17次/min,小肠收缩张力最小为16g,。用25℃的台氏液代替37℃的台氏液后,可以看到基线先上移后下降,但下降后的基线仍较原来基线水平高,此时其节律变为12次/min,小肠收缩张力最小为18g,。
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图二低温对离体小肠活动的影响()
分析:换为25℃台氏液后,由于代谢水平的降低,兴奋性减弱,频率变慢,由17/min变为12/min,收缩幅度变小。小肠平滑肌收缩活动明显受抑制,原因是小肠活动对温度 变化刺激敏感,温度降低抑制小肠收缩活动。
(3)高温对离体小肠活动的影响
如图三所示,离体肠段在适宜的温度37℃下,正常节律为16次/min,灌流45℃的台氏液后,小肠节律性收缩曲线基线先上移后下降回原水平,其节律增加为19次/min,幅度先增加再减小,后恢复到接近原来水平。
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图三高温对离体小肠活动的影响()
分析:当台氏液温度为45℃时,肠段中酶活性提高,离子通道活性增强,使得基线上移,幅度增加。肠管平滑肌对温度改变极为敏感,也反映出酶对温度的敏感。
(4)NaOH对离体小肠活动的影响
如图四所示,正常情况下,小肠平滑肌收缩的节律为16次/min,,,滴加入1滴1mol/mLNaOH后,可以明显的看到基线上移后恢复回原水平,其节律为16次/min,收缩张力最小为20g,最大为60g,其收缩强度增加,幅度增大。
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图四NaOH对离体小肠活动的影响()
分析:在加入NaOH溶液1滴后,可见小肠活动加强,幅度增加,基线上移。加入NaOH后,此时溶液的pH比较适合酶的活性作用,有利于小肠各种酶发挥作用,使小肠活动加强。如果所加入的NaOH量过多,上述现象就不会出现,因为酶的活性受到破坏。
(5)HCl对离体小肠活动的影响
如下图五所示,正常情况下小肠平滑肌收缩节律为17次/min,,。在恒温浴槽中加入一滴1MHCl后,基线略有下降,节律减少为16次/min,小肠的收缩幅度减小,,。
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图五HCl对离体小肠活动的影响()
分析:加入1mol/L盐酸溶液1滴后,离体肠管活动减弱,收缩幅度降低,频率变慢。加入盐酸后,H+浓度升高,跨膜电位改变,Ca2+离子通道活性受到抑制,使得Ca2+内流减少。
(6)CaCl对离体小肠活动的影响
如图六所示,正常情况下,小肠收缩节律为16次/min,,最大为35g,在恒温浴槽中加入2滴Cacl后,基线没有明显变化,收缩频率为17次/min,,最大为30g。
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图六CaCl对离体小肠活动的影响()
分析:加入1%***化钙溶液2滴后,离体肠管活动节律增强,理论上,加入***化钙后,Ca2+浓度升高,而Ca2+对小肠平滑肌的收缩和紧张都有促进作用。但实验结果并非如此,原因可能是加的Ca2+的量过少使Ca2+浓度变化很微弱,得不到实验结果。
(7)肾上腺素对离体小肠活动的影响
从图七可看出,正常情况下,离体肠段收缩节律为16次/min,,,加入1:5000肾上腺素后,基线明显下降,,在大约75s后收缩曲线开始缓慢恢复到原水平。
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图七肾上腺素对离体小肠活动的影响()
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