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目的
认识双向琼脂免疫扩散试验的原理和操作过程。
原理
将可溶性抗原和抗体分别加到琼脂板上相应的小孔中,使二者各自向四周扩散,如抗原与抗体相对应,二者相遇即发生特异性联合,并在比率合适处形成白色积淀线。假如所加抗原和抗体标本中分别含有若干与血清学反响没关的抗原抗体,则因各样抗原的扩散系数和各抗衡原抗体间的最适比率不一样,以及抗原抗体复合物所形成的积淀线拥有选择性浸透屏障作用,扩散后能够形成若干条积淀线,一条积淀线代表一抗衡原抗体。所以,经过双向免疫扩散试验,可用已知抗体(或抗原)检测未知抗原(抗体),可判定抗原性
物质性或免疫血清的浓度、纯度及比较抗原之间的异同点。主要用于剖析抗原或抗体成分定性判定;抗原、
抗体的纯度以及抗体效价的测定。本实验以检测血清甲胎蛋白(AFP)为例。
资料
%生理盐水琼脂。
待检血清、肝癌病人AFP阳性血清(或脐带血)。
AFP诊疗血清(抗AFP抗体)。
载玻片、琼脂板打孔器、微量加样器、吸管等。方法
,,倾注于载玻片上,使其自
然流成水平面。待琼脂凝结后,用打孔器按图打孔,孔径3mm,孔距5mm,挑出孔中琼脂。
,四周1、4孔加入已知AFP阳性比较,2、3、5、6孔分别加
入待检血清。(不一样样本应改换吸头)
将琼脂板放入湿盒内置
37温箱中,
24h后拿出察看结果。
结果察看
察看孔间积淀线的数量及特点。本试验1、4两孔(AFP阳性血清)与中央孔(抗AFP抗体)之间应出现清楚的乳白色积淀线。其他各孔
则依据与中央孔之间有无积淀线的特点判
断结果。如下图,2孔待检血清标本与中
央孔产生积淀线,并与相邻阳性比较所产
生的积淀线相互交融,则表示阳性;3、5、
6孔与7孔间无积淀线,为实验阴性。
注意事项
加样时不要将琼脂划破,免得影响积淀线的形成。
反响时间要适合,时间过长,积淀线可解离而致使假阴性,时间太短,则积淀线不出现或不清楚。
加样时抗体、阳性血清及每份待检标本应各用一支加样器(或改换吸头),免得混杂,影响试验结
果。
试验前应做预试验,确立抗体的稀释度。