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李杰兰潘秀婷
【Summary】目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在不明原因复发性流产(URSA)患者外周血中表达水平及临床意义。方法:选取本院收治的52例URSA早孕妇女为观察组,46例正常早孕妇女为对照组。比较两组外周血辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)、Th17/Treg比值和相关指标(HMGB1、IL-17、IL-6、TGF-β及IL-10)的表达水平,分析HMGB1与各指标的相关性。结果:观察组外周血Th17细胞和Th17/Treg比值均高于对照组,Treg细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<);观察组外周血HMGB1、IL-17、IL-6水平均高于对照组,TGF-β、IL-10水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<);相关性分析显示,HMGB1与IL-6、IL-17、Treg、Th7均呈正相关(P<),HMGB1与TGF-β、IL-10均呈负相关(P
【Key】高迁移率族蛋白B1;不明原因复发性流产;Th17/Treg;临床意义
【Abstract】Objective:ToinvestigatetheexpressionlevelanditsclinicalsignificanceofHMGB1inperipheralbloodofpatientswithunexplainedrecurrentspontaneousabortion(URSA).Method:Atotalof
(Th17),regulatoryTcell(Treg),Th17/Tregratioandrelatedindicators(HMGB1,IL-17,IL-6,TGF-βandIL-10)inperipheralbloodoftwogroupswerecompared,:ThelevelofTh17cellsandTh17/Tregratioinperipheralbloodofobservationgroupwerehigherthanthoseofcontrolgroup,theTregcellswaslowerthanthatofcontrolgroup,thedifferenceswerestatisticallysignificant(P
【Keywords】HighmobilitygroupproteinB1;Unexplainedrecurrentspontaneousabortion;Th17/Treg;Clinicalsignificance
First-authorsaddress:TheFourthPeoplesHospitalofNanhai,Foshan528211,China
doi:.1674-
复发性流产(RSA)是指连续2次或更多次的自然流产,其发生病因很复杂,除了生殖道解剖异常的原因,染色体异常、内分泌异常和自身免疫疾病外,还未发现其他导致流产的原因,称为同种免异型,也可称为原因不明复发性流产(URSA)[1-2]。相关证据表明,不明原因的复发性流产可能与免疫因素有关,而母体胎儿免疫耐受是一种重要的免疫因子,占50%~70%[3]。国内外许多研究發现,高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一种强有力的促炎因子和炎症介质,HMGB1通过与细胞表面受体结合的一系列信号转导途径促进炎症反应的发展[4-
6]。因此,本文旨在探讨URSA是否参与到HMGB1的发生,通过分析HMGB1在URSA患者外周血中的表达水平,以为URSA的临床诊断和治疗效果提供依据。现报道如下。
1资料与方法
-2016年7月本院收治的52例URSA早孕妇女为观察组。诊断标准:患者连续2次或更多次自然流产,无死产、活产史;检查后没有与流产有关的常见发现原因[7]。纳入标准:既往无自然流产史;月经周期规律;年龄25~45岁。排除标准:甲状腺功能异常、妊娠者;自身免疫性疾病者;低纤维蛋白血症及血小板增多症。另选取同期46例正常早孕妇女为对照组,均无遗传和自然流产史,无死胎或解剖和内分泌异常,怀孕期间未发生生殖道感染。该研究由医院伦理委员会审查,患者均被告知并签署治疗同意书。
:CO2培养箱,AccuriC6型流式细胞仪(美国BD公司),离心机。试剂:鼠抗人CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-PE、CD25-APC、CD69-PE、IL-17和Foxp3-PE荧光抗体,PBMC细胞悬液、佛波醇、离子霉素、流式辅助试剂、RPMI-1640细胞培养基和同型对照试剂,破膜剂缓冲液。
(1)标本采集:抽取两组次日清晨空腹静脉血4mL,然后在离心机中离心5min,制备PBMC细胞悬液,最后贮存在冰箱中-20℃检查。(2)采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血浆HMGB1表达水平,具体操作严格按照试剂盒说明书进行,试剂盒购于BD公司;(3)辅助性T细胞17(Th17)检查:通过流式细胞术,在洁净实验台上消毒30min,向离子霉素、佛波醇、助流剂和RPMI-1640细胞培养基中加入150μL静脉血,将体积
分数孵育6h。5%CO2培养箱取出细胞悬浮液,转移到试管中,离心加入RPMI-1640细胞培养基和同种型对照试剂摇动,在黑暗中培养30min,加入透化缓冲液,除去上清液。然后用2mL工作溶液离心。加入400μL染色溶液,并使用AccuriC6流式细胞仪检查Th17水平。(4)调节性T细胞(Treg)检测:取100μLPBMC细胞悬液于试管中,加入CD4-FITC、CD25-APC振荡,在黑暗中孵育20min,用缓冲液洗涤,取出上清液,检查机器。然后加入Foxp3-PE荧光抗体和同种型对照试剂,在4℃孵育40min,加入2mL透化缓冲液,用工作溶液洗涤两次,将细胞重悬于细胞染色缓冲液中,用流式细胞仪检查。
、Treg细胞和Th17/Treg比例;比较两组外周血中相关指标表达(HMGB1、IL-17、IL-6、TGF-β、Th7及IL-10);分析HMGB1与IL-6、IL-17、TGF-β、IL-10、Treg、Th7细胞因子的相关性。
,计量资料用(x±s)表示,组间比较采用t检验;计数资料以率(%)表示,比较采用字2检验;相关性采用Pearson直线相关性分析。以P<。
2结果
(P>),具有可比性,见表1。
、Treg细胞和Th17/Treg比例比较观察组外周血Th17细胞和Th17/Treg比值均高于对照组,Treg细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<),见表2。
、IL-17、IL-6水平均高于对照组,TGF-β、IL-10水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<),见表3。
-6、IL-17、TGF-β、IL-10、Treg、Th17的相关性分析相关性结果显示:HMGB1与IL-6、IL-17、Treg、Th17均呈正相关(P<),HMGB1与TGF-β、IL-10均呈负相关(P<),见表4。
3讨论
据报道,由于近一半的RSA患者原因尚不清楚,治疗效果不理想,使其成为临床上难治性不孕的原因[8]。因此,如何做好URSA患者外周血中表达及临床意义已成为生殖医学领域亟待解决的问题[9-11]。近年来,随着生殖免疫学、遗传学、分子生物学的迅速发展,URSA的基础研究和临床诊断得到了很大的改善[12]。众所周知,URSA是非常有害的,因此探讨其病因是生殖领域一项重要研究。
HMGB1是一种核蛋白,以其在聚丙烯酰***凝胶电泳中的高迁移力而得名。于1999年首次发现,释放到细胞外介导的炎症反应中,作为局部和全身炎症性疾病中的重要炎症细胞因子[13-15]。可能是治疗各种疾病的新靶点,还可能影响机体细胞免疫功能,引发感染后免疫功能紊乱。HMGB1在细胞核中的主要功能是与DNA结合。通过与各种转录因子,复制蛋白和类固醇受体相互作用,为了参与DNA复制、重组、修复和转录,细胞外HMGB1表达水平与免疫炎症密切相关。这表明HMGB1的这种性质在其炎症中起重要作用[16-17]。
本研究结果显示,观察组外周血Th17细胞和Th17/Treg均高于对照组,Treg细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<);其中HMGB1与IL-6、IL-
17、Treg、Th7均呈正相关(P<),提示HMGB1可促进炎症因子的释放;HMGB1与TGF-β、IL-10均呈负相关(P
综上所述,URSA患者外周血HMGB1水平增高,其可能通过影响Th17/Treg平衡参与URSA的发病。
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