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1、擦干净玻璃板,从凹玻板上边向下量2公分距离,做分离胶高度标记。
2、膜具安装
内槽(上槽)
两板对齐凹板朝里
斜插板斜面朝外,双
手均匀用力将板尽量
插到底部
,立即小心地加入蒸馏水(去气泡、隔氧),等待分离胶聚合。
凝胶溶液配制:(可灌2块胶)
试剂名称
配制10ml不同浓度分离胶
所需各种试剂用量/ml
配5ml浓缩胶
所需试剂量/ml
5%
%
10%
12%
15%
3%
29%Acr—%Bis液

分离胶缓冲液

-
浓缩胶缓冲液
-
-
-
-
-

10%SDS溶液

蒸馏水

10%AP溶液

TEMED试剂

总体积

灌胶注意事项:
准备好所需用品,临用前加入TEMED,搅匀,用滴管迅速灌胶。
。
。
,将覆盖的水倒干净,用滤纸吸去多余的水,灌上层浓缩胶至满,除去气泡,立即插入梳子,等待浓缩胶聚合。
注意梳子正面朝里
插入

1)样品的处理
计算离心管中冻干的猪胰蛋白酶的重量,加入蒸馏水配制成浓度为4mg/ml的水溶液,从中取出50ul溶液到另一小离心管中,加入50ul样品溶解液配制成浓度为2mg/ml样品液。轻轻盖上离心管盖子,在100℃沸水浴中保温3分钟,以除去亚稳态聚合物,取出,冷却后加样。水溶液样品密封冰冻保存。
:
电泳条件:
I=25mA/板
V=200V
P=50W
T=1小时
当兰色指示剂前沿接近凝胶板底部时,结束电泳。
角,顺着翘角滴加水,胶片自动从玻板脱落到染料盒中。用水漂洗数遍后摇床中染色1小时,脱色过夜至蛋白条带清晰,背景透明无色。