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北京赛托森生物科技发展有限公司
质量管理
干细胞微生物学检测标准操作规程
文件名:干细胞微生物学检测标准操作规程
文件编号:
拟定人:
日期:
年
月
日
文件种类:工作标准
审察人:
日期:
年
月
日
版
次:第一版
赞同人:
日期:
年
月
日
印
数:共5份
见效日期:
年
月
日
颁发部门:质量管理
发散至:质量副总经理、质量管理部、QC检验室、综合办公室
校正号校正人赞同日期见效日期原由及目的
变
更
记
载
一、总则
目的:建立针对实验室干细胞微生物学标准操作程序,用以规范员工的检测操
作。
范围:适用于公司内部生产干细胞的微生物学检测工作
责任:生产部、生产车间、质量管理部、QC检验室主任、检验员对本规程的执行
负责。
检测依据:YY/-1995药品检验操作规程,第6部分,微生物测定法。二、细菌检测
所用检测试剂耗材及仪器
液体培养基:硫乙醇培养基、离心管、一次性巴斯德管琼脂培养基:胰酪胨大豆琼脂培养基、培养皿、接种环电热恒温恒湿培养箱(温度可调25℃-37℃)、
检测过程全程需在超净工作台内完成,注意无菌操作。
培养基详尽配制方法详见SOP/ZK/006
液体培养基:
①取培养液待恢复室温
②将待检样本及培养基过分后拧开盖子
③利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中1-2ml
④将加入待检样本的培养液过分后拧紧盖子
⑤坐上标记方便记录与查察结果
⑥37℃培养5-7天查察结果
⑦结果判断:培养液浑浊为细菌污染,清明则为未污染。
⑧做好结果记录并填写质量报告
琼脂培养基:
①取培养皿待恢复室温
②将待检样本过分后拧开盖子
③利用一次接种环将样本接种于培养液皿中
④坐上标记方便记录与查察结果
⑤将培养皿倒扣置培养箱中
⑥37℃培养3-5天查察结果
⑦结果判断:培养皿上有否出现可疑菌落,如有则为细菌污染,若培养至第5天未见可疑菌落,则未污染
⑧做好结果记录并填写质量报告
三、真菌检测
所用检测试剂耗材及仪器
液体培养基:改良马丁培养基、离心管、一次性巴斯德管琼脂培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基、培养皿、接种环电热恒温恒湿培养箱(温度可调25℃-37℃)、超净工作台
操作方法
检测过程全程需在超净工作台内完成,注意无菌操作。培养基详尽配制方法详见SOP/ZK/006
液体培养基:
取培养液待恢复室温
②将待检样本及培养基过分后拧开盖子
③利用一次性巴斯德管将样本滴入培养液中1-2ml
④将加入待检样本的培养液过分后拧紧盖子
⑤坐上标记方便记录与查察结果
⑥26℃培养5-7天查察结果
⑦结果判断:培养液浑浊为真菌菌污染,清明则为未污染。
⑧做好结果记录并填写质量报告
琼脂培养基:
①取培养皿待恢复室温
②将待检样本过分后拧开盖子
③利用一次接种环将样本接种于培养液皿中
④坐上标记方便记录与查察结果
⑤将培养皿倒扣置培养箱中
⑥26℃培养3-5天查察结果
⑦结果判断:培养皿上有否出现可疑菌落,如有则为细菌污染,若培养至第5天未见可疑菌落,则未污染
⑧做好结果记录并填写质量报告
四、支原体检测
支原体快速法:
①所有操作均在室温(22-28℃)下进行
②打开检测板,在孔中加入40μLReactionBuffeA
③第一个孔加入10μL阴性比较,其他孔加入10μL待测样品或阳性比较
④轻轻混匀,室温孵育5分钟
⑤所有孔中均加入40μLReactionBuffeB
⑥轻轻混匀,室温孵育4分钟
⑦每孔加入5μLStopSolution,轻轻混匀
⑧可在30分钟内观察样品颜色的变化或进行拍照保存:
结果解析
若是待测样品的颜色深于阴性比较,表示样品被支原体污染
若是待测样品的颜色与阴性比较相同,表示样品没有支原体污染
⑨做好结果记录并填写质量报告
支原体ELISA法:
①编号:将样品对应微孔挨次编号,每板应设阴性比较2孔、阳性比较2孔、空白比较1孔(空白比较孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作相同)
②加样:分别在阴、阳性比较孔中加入阴性比较、阳性比较50μl。尔后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,尔后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不波及孔壁,轻轻晃动混匀
③温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟
④配液:将30倍浓缩冲洗液用蒸馏水30倍稀释后备用
⑤冲洗:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满冲洗液,静置30秒后弃去,这样重复5次,拍干
⑥加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外
⑦温育:操作同3
⑧冲洗:操作同5
⑨显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟
⑩停止:每孔加停止液50μl,停止反应(此时蓝色立转黄色)
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加停止液后15分钟以内进行