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实验三菌种的分别纯化技术——平板划线法
实验目的
认识平板划线分别纯种的原理,并熟练掌握该操作法。
实验内容
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实验原理
平板划线分别法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物集体中的不同样细胞用接种环
在平板培养基表面经过分区划线稀释而获取很多独立分布的单个细胞,经培养后生长生殖成
单菌落,平时把这种单菌落看作待分别微生物的纯种。有时这种单菌落其实不是都由单个细胞繁
殖而来的,故必定屡次分别多次才可获取纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多
次作“由点到线”稀释而达到分别目的的。
划线的形式有多种,可将一个平板分成四个不同样面积的小区进行划线,第一区(A区)面积
最小,作为待分别菌的菌源区,第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区,第四区(D区),
则是要点区,使该区出现大量的单菌落以供优选纯种用。为了获取很多的典型单菌落,平板
上四区面积的分配应是D>C>B>A。
实验器材
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混杂菌悬液
牛肉膏蛋白胨培养基
无菌培养皿,水浴锅,接种环等。
实验步骤
:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。
:待培养基冷却至50℃左右,按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1),平置,待
凝固。
倒平板的方法:右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边,用左手将试管塞或瓶塞轻
轻地拨出,试管或瓶口保持对着火焰;尔后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也
可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。若是试管内或三角瓶内的培养基
一次用完,管塞或瓶塞则不用夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰周边打开一缝,迅
速例入培养基约15m1,加盖后轻轻摇动培养皿,使培养基均匀分布在培养皿底部,尔后平
置于桌面上,待凝后即为平板。
、B、C、D四个面积不等的地域。各区之间的交
角应为120℃左右(平板转动必然角度约60℃),以便充分利用整个平板的面积,而且采用
这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行,并可防范此两区线条相接触。
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挑取他含菌样品:采用平展、圆滑的接种环,按无菌操作法挑取少量菌种。
(2)划A区:将平板倒置于煤气(酒精)灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面,有
培养基一面向着煤气灯(这时皿盖向上,仍留在煤气灯旁),右手拿接种环先在A区划3—4
条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定)。划完A区后应马上烧掉环上的残菌,以
免因菌过多而影响后边各区的分别收效。在烧接种环时,左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方
(不要放入皿盖内),以防范杂菌的污染。
(3)划其他区:将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下,并使B区转到上方,接
种环经过A区(菌源区)将菌带到B区,随即划数条致密的平行线。再从B区作C区的划线。
最后经C区作D区的划线,D区的线条应与A区平行,但划D区时切勿重新接触A、B区,
省得极该两区中茂盛的菌液带到D区,影响单菌落的形成。随马上皿底放入皿盖中。烧去
接种环上的残菌。
:将划线平板倒置,于37℃(或28℃)培养,24hr后观察。
实验结果及谈论
检查每个平板划线分其他结果,并绘制菌苔、菌落分布草图。
针对实验原理、步骤、现象进行谈论。
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