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课题3血红蛋白的提取和分离
课题背景
蛋白质是生命活动不可缺少的物质。随着人类基因组计划的进展以及多种生物基因组测序工作的完成,人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白质的研究与应用,首先需要获得纯度较高的蛋白质。因此,从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是生物科学研究中经常要做的工作。血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分负责血液中O2和CO2的运偷。在本课题中,我们将以血红蛋白为实验材抖,学****蛋白质提取和分离的一些基本才技术
血红蛋白的提取与分离
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题:
1、含量
2、组成元素
3、相对分子质量
4、基本组成单位:
结构简式:
种类:
5、氨基酸连接方式
占细胞干重的50%以上,细胞中含量最多的有机物
C、H、O、N
高分子化合物
氨基酸
R
H
C
COOH
NH2
脱水缩合
血红蛋白的提取与分离
知识回顾--------有关蛋白质的几个问题:
6、肽键
7、分子结构
8、蛋白质多样性的原因:(多样性的根本原因)
9、蛋白质的鉴定方法
氨基酸
肽链
蛋白质
脱水缩合
盘曲折叠
(n条)
细胞和生物体的结构物质,是一切生命活动的主要承担者。
CO
NH
氨基酸的种类不同;数目成百上千;排列顺序变化多端;多肽链的空间结构千差万别
10、生理功能
细胞和生物体的结构物质,是人体发育和组织更新的主要原料,具有运输、调节、免疫、催化等作用,是一切生命活动的主要承担者
血红蛋白的提取与分离
①氨基酸间脱水缩合时,原来的氨基和羧基就不存在了,形成的化合物即多肽的一端只有一个氨基,另一端只有一个羧基(不计R基上的氨基和羧基)。所以对于一条多肽链说,至少应有的氨基和羧基都是一个
②若有个n氨基酸分子缩和成m条肽链,则可形成n-m个肽键,脱去个n-m个水分子,至有氨基和羧基各m个
11、相关计算
③蛋白质可以含有一条或n条肽链、肽链通过化学键(如二硫键)互相连接,具有不同的空间结构
④关于蛋白质相对分子量的计算:n个氨基酸形成m条肽链,每个氨基酸的平均相对质量为a,那么由此形成的蛋白质的相对分子量为n·a-(n-m)·18
血红蛋白的提取与分离
关于血红蛋白
1、元素组成
2、分子结构
3、颜色
4、存在细胞
5、生理功能
6、获得方法、
血红蛋白的提取与分离
根据蛋白质各种特性的差异,
如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等,可以用来分离不同蛋白质。
问:依据什么来分离和提取蛋白质(原理P65T5-13)
基础知识
血红蛋白的提取与分离
阅读并回答 (P64)
1、凝胶色谱法另一个名称;
2、凝胶色谱法分离蛋白质的依据;
3、凝胶的实质;
4、凝胶色谱法
5、凝胶色谱法的原理。
基础知识 (一)凝胶色谱法
血红蛋白的提取与分离
1、凝胶色谱法的别名:分配色谱法
是根据相对分予质量的大小分离蛋白质的有效方法。
4、凝胶
①性质:一些微小的多孔球体,球内含许多贯穿的通道;
②化学本质:多糖类化合物:
③实例:葡聚糖、琼脂糖:
2、凝胶色谱法的概念:
根据被分离物质的蛋白质相对分子质量的大小,利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,来进行分离。
基础知识 (一)凝胶色谱法
3、依据的特性蛋白质分子量的大小。
5、具体过程
血红蛋白的提取与分离
原理:当不同的蛋白质通过凝胶时,相对()的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程(),移动速度(),而()的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在()移动,路程(),移动速度(),相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
相对分子质量较小
较长
较慢
相对分子质量较大
凝胶外部
较短
较快
基础知识 (一)凝胶色谱法
血红蛋白的提取与分离