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高效液相色谱法进展及其在卫生检验中的应用孙成均.ppt

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介绍的主要内容
概述
高效液相色谱仪组成及进展
从色谱图的异常推测故障
高效液相色谱法在卫生检验中的应用
一、概述
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪70年代发展起来的一种分离分析技术,在色谱技术中应用最广。
据估计,世界上数百万种有机化合物中除20%宜用气相色谱法(GC)分离分析外,其余80%(包括大分子化合物、离子型化合物、热不稳定化合物以及有生物活性的化合物)均可用HPLC分离分析。
自1980年代以来,HPLC成为国际分析化学界发展最快的一种分离分析技术,在工农业、医药卫生、环境监测等众多领域有广泛应用。
液相色谱的发展简史
1903年,俄国植物学家Tswett在华沙大学研究植物叶组成时,用碳酸钙作吸附剂分离植物叶石油醚萃取物;是最早的液固色谱法。
1931年,德国Kuhn和Lederer用氧化铝和碳酸钙分离了α,β和γ-胡萝卜素;此后用这种方法分离了60余种这类色素;
1970年代初;高压泵和化学键合固定相结合,出现高效液相色谱;
1970年代末,出现反相色谱柱;1980年代得到广泛应用;
1980年代末,出现毛细管超临界流体色谱和毛细管电泳。
液相色谱基本原理
溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
分离原理示意图

中等

淋洗液
二、高效液相色谱仪组成及进展
HPLC仪器一般由输液系统、进样器、色谱柱、检测器和计算机控制及数据处理系统(工作站)组成。

对高压输液泵的要求:
密封性好,输出流量恒定,压力平稳,可调范围宽,便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求;可调范围宽,既能满足微柱(内径1~2mm)分析,也能满足常规柱(内径4mm)分析,甚至还可满足半制备柱(内径10mm)的需求。
目前HPLC常用的是双泵头往复式柱塞泵,流速范围一般为~10ml/min。它是由两个泵头交替工作来保证系统中液流不中断。
往复式柱塞泵
洗脱方式
等度洗脱(IsocraticElution):溶剂组成恒定,在整个洗脱过程,流动相极性保持恒定。
梯度洗脱(GradientElution):流动相组成和极性随洗脱过程而改变。