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营养:从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质,满足生长和繁殖需要的一种生理过程。是生命活动的物质基础,是生命活动的起点。
营养物:具有营养功能的物质。也包括光能。提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。
营养要素:碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水
培养基:人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。要求(yāoqiú):应具备6大营养要素;物质比例合适;必须灭菌。
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选用和设计培养基的原则、方法
及制备过程:
原则:目的明确、营养协调、经济节约
物理化学条件(tiáojiàn)适宜
方法:生态模拟、查阅文献
精心设计、试验比较
步骤:称量、熔化、调PH、过滤、分装、
加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查
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培养基种类:
一、按成分的不同分
天然培养基、合成培养基、半合成培养基
二、按培养基的物理状态分
固体培养基、液体培养基、半固体培养基
三、按培养基用途(yòngtú)
基础培养基、选择培养基
加富培养基、鉴别培养基
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消毒与灭菌
消毒:消灭病原菌和有害微生物的营养体
灭菌:杀灭一切微生物的营养体,芽胞和孢子。
方法(fāngfǎ):
一、物理的方法:加热、过滤、辐射
二、化学的方法:用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破坏细菌代谢机能。如重金属离子,磺***类药物及抗生素等。
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加热法:
干热法:火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属(jīnshǔ)用具如镊子等,试管口和瓶口,涂布用玻璃棒。
2、热空气灭菌利用高温干燥空气(160-170C)加热灭菌1-2h,适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性,与水的含量有关,当环境和细胞含水量越大,凝固越快。
3、注意事项:
1)培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法;
2)温度控制在<180°;
3)物品不能太挤;
4)温度降至70°时才开箱门。
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湿热法:
原理:因为湿热中菌体吸水,蛋白质容易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。
高压蒸汽灭菌法:
1、设备:高压灭菌锅
2、时间长短根据(gēnjù)灭菌物品的种类和数量不同有所变化。
3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌,也可用于玻璃器皿的灭菌。
4、注意事项:
1)冷空气彻底排除;2)加水;3)压力降为“0”时方可打开。
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常压蒸汽灭菌:
对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基,含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。
煮沸灭菌法:
适用注射器和解剖(jiěpōu)器皿,时间10-15min,
超高温杀菌
135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品。
优点:保持食品价值和营养成分。
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过滤除菌:
原理:介质在有压力时阻隔微生物。
适用范围:许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。
设备:蔡氏过滤器,滤膜过滤器。
优缺点:不破坏培养基成分,只适用少量滤液。需大量无菌空气以及净化(jìnghuà)工作台。
注意事项:1、压力适当;
2、无菌条件下进行;
3、防止渗透现象。
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辐射灭菌:
原理(yuánlǐ):紫外线波长在200-300nm,具有杀菌作用,以265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收;可产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。
缺点:穿透力不大。距照射物<。
应用:无菌室,医院。
注意事项:对眼睛和皮肤有刺激作用。
射线灭菌:r射线,穿透力强,适用于堆积物品的灭菌。
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化学药品灭菌:
原理:应用化学制剂破坏细菌代谢机能。
杀菌剂如重金属离子;
抑菌剂如磺***类及多数抗生素。
注意:与药品的浓度高低,时间长短,微生物种类(zhǒnglèi)以及微生物所处的环境有关。
常用化学杀菌剂有:乙醇、醋酸、石碳酸
福尔马林、升***、高锰酸钾、新洁尔灭等
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