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一原理
许多病毒具有凝集动物红细胞的能力,这种凝集能力可被相应的抗体所抑制,故可用已知病毒检测相应的血凝抑制抗体.
也可以用已知标准抗体对分离的病毒进行鉴定.
红细胞凝集抑制试验
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二使用范围
新城疫、
禽流感、
减蛋综合征、
鸡毒支原体、
滑液囊支原体等病原微生物感染后的抗体检测;或相应病原分离后的鉴定
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三器材
、
%红细胞悬浮液
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四操作程序
(一)%――1%红细胞的准备
(抗凝剂)的配制
葡萄糖
柠檬酸钠
柠檬酸
***
蒸馏水100ml
混匀放入100ml葡萄糖瓶内,10磅115度10分钟
高压灭菌。冷却后4℃保存备用。
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取健康鸡翅静脉或心脏采血,(按阿氏液2份,血液1份)
注意:(1).两只健康的鸡血混合;
(2).阿氏液的量要够
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:
将血液注入离心管中,经3000转/分钟,离心5-10分钟,用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜,将沉淀的细胞加稀释液(生理盐水)洗涤,再用离心机3000转/分钟离心5-10分钟,充去上清液,再加稀释液洗涤,
如此反复洗涤三次,将最后一次离心后的红细胞,按1%的稀释度加入稀释液(1毫升红细胞泥加99毫升稀释液)。
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(二).被检血清
将被检鸡群编号登记,用消毒过的干燥注射器采血,注入洁净干燥试管内(微量法可用孔经2-3毫米塑料管由翅静脉采血),在室温中静置或离心,待血清析出后使用。
注意:每只鸡应更换一个注射器,严禁交叉使用。
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(三)血凝抗原效价测定(操作量25ul)
(1)抗原一般以鸡新城疫II系或Lasota系作为已知抗原。
来源:
1).购买:
目前也有用聚乙二醇使Lasota系病毒液浓缩,作
成稳定浓缩抗原,HA效价达1:5000以上,4℃半年
不变。
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2)自制:
:
,;
-120小时内死亡的鸡胚,且病变显著者,分别收获鸡胚尿囊液于消毒试管内,如有血细胞应离心(2000转/分钟)15分钟,取上清液;
,其凝集价在1:640以上的鸡胚鸡,分装于洁净干燥的青霉素瓶中,保存于冰箱备用。
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