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TotalInternalReflectionFluorescence(TIRF)
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全内反射荧光显微镜(TIRFM)
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目前用于单分子研究的检测技术主要有两大类:扫描探针显微技术(SPM)和光学技术。其中:
SPM
原子力显微技术(AFM)
扫描离子电导显微技术(SICM)
扫描隧道显微技术(STM)
光学技术
光学显微镜成像
光学操纵
共聚焦荧光显微技术
(LSCM)
扫描近场光学显微技术
(SNOM)
全内反射荧光显微技术
(TIRFM)
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上世纪80年代,Axelrod等生物物理学家对TIRFM技术及基本原理进行描述,并探索了其在生物方面的应用。
发展历程
Axelrod,Julius
阿克塞尔罗德(Axelrod,Julius)美国生物化学家及药理学家。1970年他与卡茨冯奥伊勒共享了诺贝尔生理学和医学奖。于美国卫生研究院度过其大部职业生涯。他研究药物及激素的作用、神经冲动传播的化学方面,并特别研究松果体的功能。
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光反射和折射示意图
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全内反射示意图
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n1
n2
Refracted
TIR
n1>n2
光的反射和折射
Snell定律:
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当入射角不断增大,透射角为增大90°时,入射角达到临界角θc。依据Snell定律得出:
当入射角继续增大时,光不再透射进水溶液,即发生了全内反射。
90º
n1
n2
TIR
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实际上,由于光的波动效应,有一部分光的能量会透过临界面渗透到水溶液中,平行于界面向水溶液中传播,这一部分透过的能量场则称之为“隐失波”或“隐失场”。
隐失波
90º
n1
n2
TIR
隐失波
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