测定糖化酶活性的方法课件.ppt

文档介绍：该【测定糖化酶活性的方法课件 】是由【luyinyzhi】上传分享，文档一共【16】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【测定糖化酶活性的方法课件 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。测定糖化酶活性的方法
糖化酶又称葡萄糖淀粉酶,糖化酶是一种****惯上的名称,学名为α-1,4-葡萄糖水解酶(α-1,4-Glucanglucohydrolace)。多应用于酒精、淀粉糖、味精、抗菌素、柠檬酸、啤酒等工业以及白酒、黄酒。糖化酶是由曲霉优良菌种(Aspergilusniger)经深层发酵提炼而成。糖化酶是食品工业中常用的一种酶。
糖化酶是由一系列微生物分泌的具有外切酶活性的胞外酶。糖化酶的主要作用是从淀粉、糊精、糖原等碳链上的非还原性末端(整个碳链只有一个还原端,与之相对的都是非还原端)依次水解a-1,4糖苷键,切下一个个葡萄糖单元,并像β-淀粉酶一样,使水解下来的葡萄糖发生构型变化,形成β-D-葡萄糖。对于支链淀粉,当遇到分支点时,它也可以水解a-1,6糖苷键,由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。糖化酶也能微弱水解a-1,3连接的碳链,但水解a-1,4糖苷键的速度最快,它一般都能将淀粉百分之百地水解生成葡萄糖。
糖化酶以可溶性淀粉为底物在一定条件下(pH范围是4~6,温度范围是40~60℃)进行反应,生成的葡萄糖用次碘酸钠法定量测定。以单位时间内分解α–1,4糖苷键生成葡萄糖所需的酶量为酶的活力单位。
次碘酸钠法:
碘与NaOH作用能生成NaIO,而葡萄糖能定量地(1:1)被NaIO氧化在酸性条件下,未与C6H12O6作用的NaIO可转变成I2析出,因此只要用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2,便可计算出未参与反应的NaIO,由此推导出糖化酶催化所产生的C6H12O6的含量。
具体步骤
:
I2+2NaOH=NaIO+NaI+H2O
:
C6H12O6+NaIO=C6H12O7+NaI
,剩余的NaIO在碱性条件下发生歧化反应:
3NaIO=NaIO3+2NaI
:
NaIO3+5NaI+6H2SO4=3I2+6Na2SO4+3H2O
:
I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI
注:在这一系列的反应中,1mol葡萄糖与1molNaIO作用,而1molI2产生1molNaIO,因此,1mol葡萄糖与1molI2相当。只要得出对照组和实验组所消耗的硫代硫酸钠体积,两者相减就可以得出与葡萄糖反应的那部分次碘酸钠的量,从而可以确定酶解生成的葡萄糖的量,从而计算出酶活。
试剂与器材
;
、滴定台、试剂瓶、试管、三角瓶、pH计、电子天平;

2%可溶性淀粉溶液;、;;;2mol/L硫酸溶液;;%淀粉指示剂。
,,(注意:加碱速度不能过快,否则过量NaIO来不及氧化C6H12O6而歧化为不与C6H12O6反应的NaIO3和NaI,使测定结果偏低),摇匀后在暗处放置15min后加入2mol/L硫酸2ml;
%可溶性淀粉为指示剂(4-5滴即可),。:酶液样品(A)、空白对照(B);
(2)在上述条件下,1ml酶液每分钟催化2%淀粉溶液水解生成1μmol葡萄糖的酶量定义为1个酶活力单位(U):
酶活力单位(U/ml)=(B-A)×10-3×(N/2)×(8/5)×106×2×(1/10)
式中符号与前式相同,
其中:
10-3——ml换算成L。
106——μmol换算成mol。