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简介:
石蜡切片是教学与研究工作中广泛运用的一种实验技术,特别对于细胞学、组织学、胚胎学、病理学,更是一种必备的研究方法。对于不同的显微镜具体的制作切片的技术也是不同的!
现在以苏木精、伊红染色的常规制片为例作具体讲解!
整个石蜡切片的完成过程
染色液的配制
Ehrlich氏苏木精
苏木精:2g;
无水乙醇:100ml;
冰醋酸:10ml;
铝化钾或硫酸铝钾:10g;
蒸馏水:100ml;
甘油:100ml。
配制方法:
(加热至40~45℃);
,再加入冰乙酸、温热的铝化钾或硫酸铝钾溶液,最后加入甘油;
,置于温热和阳光充足处,成熟3个月,即可使用。
伊红溶液的配制
:
伊红Y(-)+95%无水乙醇(100ml),过滤。混合即可使用。
:
伊红Y(-)+100ml蒸馏水,溶解至溶液中无伊红沉淀,过滤即可使用。
%~1%盐酸酒精溶液的配制
浓盐酸(~1ml)+70%~90%酒精溶液100ml,混合均匀即可。
注意事项:因为浓盐酸对皮肤具有强烈的腐蚀作用及对呼吸道具有刺激作用,因此在配置的过程中一定要注意自身的安全。
不同浓度梯度酒精配制
梯度酒精的作用:
将组织中的水分经过梯度酒精的作用,置换出来,以达到组织脱水的目的。
配制:例如70%的酒精配制,70ml(100%纯酒精)+30ml蒸馏水混匀即可。
第一步:取材
一般根据观察目的选取动物或人体组织,取材要迅速,组织块不宜太大,一般为组织学观察,取黄豆大小为宜。取材要用锋利的刀剪,不可用钝刀,更不可用力压、揉、挤等,以免损坏组织。
第三步:冲洗、脱水、透明。
冲洗的目的在于弃去组织中过剩的固定剂,以免固定剂沉淀于组织之中影响切片的质量。
脱水的过程就是用梯度酒精逐步取代水的过程,组织脱水一般由70%——80%——90%——95%——100%梯度酒精完成。在95%的时间可以稍长(注意:70%以上的酒精要回收利用)。
脱水之后,将组织块放入100%的酒精+二甲苯溶液(1:1)再放入二甲苯溶液直到组织块透明为止,透明需要半小时到一小时左右。