文档介绍：正交实验法研究铁皮石斛原球茎分化影响条件
[摘要] 利用6-BA、IBA、NAA和外源添加物四个因素三水平进行L9 ( 34 )正交实验, 研究
各因素对铁皮石斛原球茎分化的影响. 对实验统计通过极差分析及均值分析, 结果表明: 当6-BA的浓度为2 mg /L、IBA /L、 /L和外源添加物为苹果(50g/L)时, 原球茎最易于分化成丛生小苗; 影响原球茎分化程度的因素依次为6-BA浓度﹥外源添加物﹥NAA浓度﹥IBA浓度。
[关键词] 铁皮石斛;组织培养;原球茎分化;正交实验。
1 前言
目的意义
铁皮石斛( Dendrobium candidum Wall. ex Lindl. ) 为兰科石斛属多年生附生型草本植物,别名铁皮兰,因其茎节处呈黑褐色,又名黑节草[ 1]。利用石斛茎尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来, 石斛组织培养技术逐步走向深入化。目前, 有关铁皮石斛的原球茎分化和生根条件的研究大都基于单因素试验, 如不同培养基、激素浓度、无机盐浓度、碳源、pH 等以及香蕉、马铃薯等附加物[2]。但是铁皮石斛原球茎分化及生根受培养基中综合因素的共同影响, 不同因子的合理配置决定着培养基的科学性和高效性. 运用正交实验设计可以精简试验次数、克服培养基配方设计的盲目性、大大提高工作效率和试验的可靠性。
研究进展
自1960年法国人Gmore l利用石斛茎尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来, 石斛组织培养技术逐步走向深入化. 目前, 有关铁皮石斛的原球茎分化和生根条件的研究大都基于单因素试验, 如不同培养基、激素浓度、无机盐浓度、碳源、pH 等以及香蕉、马铃薯等附加物. 运用正交实验设计可以精简试验次数、克服培养基配方设计的盲目性、大大提高工作效率和试验的可靠性. 广东省植物研究所关于籼稻花药的离体培养的报道, 还相继在兰科植物中得到了应用[3], 但尚未应用于铁皮石斛的离体培养. 本实验利用6-BA、IBA、pH 和培养基种类、琼脂浓度、KCl浓度各三因素三水平及空白对照分别设计两套L9 ( 34 )正交实验[4], 以期分别得到有利于铁皮石斛原球茎分化和生根的理想培养基配方.
在20 世纪70 年代,谭文澄等就进行铁皮石斛兰组织培养研究并获得完整植株。到今天,铁皮石斛的组织快繁依然是热点。归纳起来,当前铁皮石斛的组织快繁可分为种子无菌萌发、试管苗原球茎发生和试管苗器官发生3 种途径。
袁正仿等将铁皮石斛带茎节的茎段接种于培养基上( N6 + mg·L - 1 BA) 诱导茎节发芽,再将芽接种于培养基上
( N6 + mg·L - 1 BA + mg·L - 1 IBA) 诱导出原球茎,并指出只有将诱导出的小植株再诱导,诱导出大量的原球茎,才能扩大其繁殖。秦廷豪用铁皮石斛茎段、带顶芽的茎段和根蔸3 类外植体在培养基上( MS + mg·L - 1 6-BA + mg·L - 1 NAA) 培养,仅根蔸能诱导出原球茎。王春等研究表明,铁皮石斛原球茎诱导最佳培养基为1 /2 MS + mg·L - 1 BA + mg·L - 1 NAA,诱导率为58%。王丽萍等研究表明,选用铁皮石斛幼嫩茎段为外植体诱导