文档介绍：北方民族大学
学生实验报告
院(部) 生物科学与工程学院
姓名学号
专业生物工程班级
同组人员
课程名称微生物学类实验
实验名称产酶微生物的分离、纯化与选育
实验日期批阅日期
成绩教师签字
北方民族大学教务处制
产酶微生物的分离、纯化与选育
实验意义:
酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂,在生物体中已发现的酶有2500多种。由于酶促反应的特异性强,反应温和,安全无毒,环境污染少,在洗涤剂、皮革、纺织、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。能由工业生产的50多种酶制剂蛋白酶、淀粉酶等,大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌生产的。通过本实验,学会从自然界中分离产酶微生物的方法,军中的纯化技术及其高产菌的选育技术。
蛋白酶产生菌的分离与纯化
:学****从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化。

许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品(或其他样品)悬液加热处理,杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌,将其接种到酪蛋白平板进行培养,根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养,分离筛选其他蛋白酶产生菌。

土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水(带玻璃珠)、芽孢染色液;显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。

:、NaCl ,酪素 ,琼脂 ,蒸馏水100mL左右, 调节pH -。
:称取酪素1g,先用少量2%NaOH润湿,玻璃棒搅动,再加适量的蒸馏水,在沸水浴中加热并搅拌,至完全溶解,补足水量至100mL,加入其他成分,调整pH值,灭菌备用。
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采集土壤样品,用无菌水制备1:10土壤悬液。
取1:10土壤悬液5ml,然后将悬液按10-1、10-2、10-3、10-4梯度稀释,注入试管中。
3)将这些试管放入75-80 ℃水浴中热处理10 min,以杀死非芽孢细菌。
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将培养基灭菌处理。
取加热处理过的土壤悬液100-200 μL,涂布接种到酪素培养基平板,将平板倒置,于30-32 ℃培养24-48 h。
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1)根据酪蛋白平板的水解圈作初筛,挑选出单菌落的蛋白酶产生菌。
2)将挑选出的单菌落用平板划线法接种到牛肉膏蛋白胨培养基上,然后将平板倒置放于培养箱中24—48h。

1)挑去菌落涂片固定。
2)滴加1——2滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
3)用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液
4)倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
5)用番红水溶液复染1分钟,水洗至水为无色。
6)待干燥后,置油镜观察,芽孢呈绿色,菌体呈红色。
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1)用斜面划线法,取纯化鉴定后的菌种接种于斜面上,放于培养箱中24—48h。
将培养后的菌种置于冰箱中保存。
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