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样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸性条件下,亚***盐与对氨基苯磺酸(HN—
2
CH-SOH)重氮化,产生重氮盐,此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二***)偶合形成紫红色染
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料,其最大吸收波长为550nm,测定其吸光度后,可与标准比较定量。
①小型粉碎机。
②分光光度计。
③25ml具塞比色管。
①***化铵缓冲溶液:在1000ml容量瓶中加人500ml水,,
振荡混匀后,再准确加入50ml氢氧化铵,用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵
~。
②硫酸锌溶液():称取120g硫酸锌(ZnSO·7HO),用水溶解,并稀释至1000ml。
42
③氢氧化钠溶液(20g/L):称取20g氢氧化钠用水溶解,稀释至1000ml。
④对氨基苯磺酸溶液:称取10g对氨基苯磺酸,溶于700ml水和300ml冰乙酸中,置棕
色瓶中混匀,室温保存。
⑤盐酸萘乙二***溶液(1g/L):***,加60%乙酸溶解并稀释至100ml,
混匀后,置棕色瓶中,在冰箱中保存,1周内稳定。
⑥显色剂:临用前,将盐酸萘乙二***溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。仅供1
次使用。
⑦亚***钠标准储备液:***钠,用水
溶解后移入500ml容量瓶中,加100ml***化铵缓冲溶液,用水稀释至刻度,混匀,在4℃避
光保存。此溶液每毫升相当于500μg的亚***钠。
⑧亚***钠标准使用液:临用前,吸亚***,置于100ml容量
瓶中,加水稀释至刻度,混匀。***钠。
()经绞碎混匀的样品,置于250ml烧杯中,加。70ml水
和12ml氢氧化钠溶液(20g/L),混匀,用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH至8,定量转移至
200ml容量瓶中,加l0ml硫酸锌溶液,混匀。如不产生白色沉淀,可再补加2~5ml氢氧化
钠溶液,搅拌混匀。置60℃水浴中加热10min,取出后冷至室温,加水至刻度,混匀。放置
,用滤纸过滤,弃去初滤液20ml,收集滤液备用。
***盐标准曲线的绘制
、、、、、、***钠标准使用液(、、
、、、、***钠),分别置于25ml具塞比色管中。分别加入
***化铵缓冲溶液,%的乙酸,,加水至刻度,混
匀,在暗处静置25min,用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯),以零管调节零点,于
波长550nm处测吸光度,绘制标准曲线。
,按标准曲线制备程序,自“
***化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。
式中:
X—样品中亚***盐的含量,mg/kg;
m—样品的质量,g;
1
m—测定用样液中亚***盐的质量,μg;
2
V—样品处理液的总体积,ml;
1
V—测定用样液体积,ml。
2
结果以算术平均值的二位有效数字表述。
硫酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂使用,也可用亚铁***化钾和乙酸锌的混合溶液,利用产生
的亚铁***化锌与蛋白质共沉淀;实验中使用重蒸水可以减少试验误差。
2***盐的测定
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,将样品提取液通过镉柱,使其中的***根离子还原成
亚***根离子。在酸性条件下,亚***根与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二***偶合
形成红色染料,经比色测亚***盐总量,得从还原前后亚***盐量即可求得***盐的含量。
(1)镉柱
:投入足够的锌皮或锌棒于500ml200g/L的硫酸镉溶液中,经3~
4h,当溶液中的镉全部被锌置换后,用玻璃棒轻轻刮下,取出残余锌皮,使镉沉底,倾去上
层清液,以蒸馏水用倾斜法洗涤,然后移入组织捣碎机中,加500ml水。捣碎约2s,用水
将金属细粒洗至标准筛上,取20~40目之间的部分。置试剂瓶中,用水封盖保存,备用。
:如图8—3所示。用蒸馏水装满镉柱玻璃管,并装入2cm高的玻璃棉作垫。
将玻璃棉压向柱底,并将其中所包含的空气全部排出,在轻轻敲击下加入海绵状镉至8~
10cm高,上面用1cm高的玻璃棉覆盖,上置一个储液漏斗,末端穿过橡皮塞与镉柱玻璃管
紧密连接。
图8—3镉柱装置示意图
如无上述镉柱玻璃管,也可用25ml酸式滴定管代用。
当镉柱填装好后,先用25ml盐酸()洗涤,再以蒸馏水洗2次,每次25ml,镉
柱不用时用水封盖,随时都要保持水平面在镉层之上,不得使镉层夹有气泡。镉柱每次使用
完毕后,应先以25ml盐酸()洗涤,再以水洗2次,每次25ml,最后用水覆盖镉柱。
①氨缓冲溶液(~):量取20ml盐酸加50ml蒸馏水,混匀后加50ml氨水,用
水定容至1000ml。
②稀氨缓冲溶液:取50ml氨缓冲溶液,用水定容至500ml。
③对氨基苯磺酸溶液(4g/L)。
④盐酸萘乙二***溶液(2g/L)。
⑤盐酸溶液():,用水稀释至1000ml。
⑥***钠标准储备液:***钠(已于110~120℃干燥至恒重,相当
***钠),以重蒸水溶解,移于500ml容量瓶中并定容。此液浓度为200μg/ml
亚***钠。
⑦***钠标准使用液:,加水定容。此
液浓度为5μmg/ml亚***钠。
⑧亚***钠标准使用液同亚***盐的测定。
。同亚***盐测定。
①先以25ml稀氨缓冲溶液冲洗镉柱,流速控制在3~5ml/min(以滴定管代替的,可控
制在2~3ml/min)。
②吸取20ml***钠标准使用液,加入5ml稀氨缓冲溶液,混匀,注入储液漏斗,使流
经镉柱还原,以原烧杯收集流出液,当储液中溶液流完后,再加5ml水置换柱内留存溶液。
将全部收集液如前经镉柱再还原一次,第二次流出液收集于100ml容量瓶中,再用20ml水
洗涤镉柱,共洗涤3次,洗涤液收集于同一容量瓶中,加水至刻度,混匀。
③(相当于10mg亚***钠)于50ml比色管中,
对氨基苯磺酸溶液(4g/L),混匀,静置3~5min,***溶液(2g/L),
加水至刻度,混匀,静置15min,用2cm比色杯,于538nm处测定吸光度并绘制标准曲线。
根据标准曲线计算测得结果。还原效率大于98%为符合要求。
式中:
X—还原效率,%;
A—测得亚***盐的含量,μg;
10—测定用溶液相当于亚***盐的含量,μg。
***盐总量测定
①样液还原:吸取20ml样品处理液于50ml烧杯中,加5ml氨缓冲溶液,混匀后注入储
液漏斗中,使流经镉柱还原,以下按镉柱还原效率测定操作进行,收集还原后的样液于100ml
容量瓶中并定容。
②吸取10~20ml还原后的样液于50ml比色管中,以下按镉柱还原效率测定操作进行,
测得吸光度,从标准曲线上查出亚***盐量。
***盐测定
吸取40ml样品处理液于50ml比色管中,按亚***测定操作进行,测定吸光度,从标准
曲线上查出亚***盐含量。
式中:
X—***盐含量,mg/kg;
A—经镉柱还原后测得的亚***盐量,μg;
1
A—不经镉柱还原直接测得的亚***盐量,μg;
2
V—测定用经镉柱还原后样液体积,ml;
—亚***钠换算为***钠的系数;
m—样品的质量,g。
三、漂白剂的测定
漂白剂是指可使食品中的有色物质经化学作用分解转变为无色物质,或使其褪色的一类
食品添加剂。可分为还原型和氧化型两类。目前,我国使用的大都是以亚硫酸类化合物为主
的还原型漂白剂,通过产生的SO的还原作用而使食品漂白。
2
我国《食品添加使用卫生标准》(GB2760—1996)规定:亚硫酸用于葡萄酒、果酒时的用
,残留量(以SO计)。在蜜饯、葡萄糖、食糖、冰糖、糖果、
2
液体葡萄糖、竹笋、~;;
残留量(以SO计)竹笋、;;蜜饯、
2
;。
1、二氧化硫含量的测定(滴定法)
样品经过处理后,加入氢氧化钾使残留的SO以亚硫酸盐的形式固定。再加入硫酸使SO
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游离,用碘标准溶液滴定定量。终点稍过量的碘与淀粉指示作用呈现蓝色。
①分析天平。
②250ml碘量瓶。
①氢氧化钾溶液(1mol/L):准确称取57g氢氧化钾加水溶解,定容1000ml。
②硫酸溶液(1+3)。
③碘标准溶液()。
④淀粉溶液(1g/L)。
(1)称取经粉碎的试样20g于小烧杯中,用蒸馏水将试样洗入250ml的量瓶中,加水至
容量的1/2,加塞振荡,用蒸馏水定容,摇匀。待容量瓶内的液体澄清后,用移液管吸取澄
清液50ml于250ml碘量瓶中,加入1mol/L氢氧化钾溶液25ml,用力振摇后放置10min,然
后边振荡边加入硫酸溶液(1+3)10ml和1g/L淀粉溶液1ml,以碘标准溶液滴定至呈现蓝色
30s不褪色为止。
(2)按上法同时做空白试验。
式中:
X—样品中SO的含量,g/kg;
2
V—试样滴定时所消耗的碘标准溶液体积,ml;
1
V—空白滴定时所消耗的碘标准溶液体积,ml;
2
c—标准溶液的浓度,mol/L;
—SO的摩尔质量,g/mol;
2
m—样品的质量,g。
2亚硫酸盐的测定(盐酸副玫瑰苯***法)
亚硫酸盐与四******钠反应生成稳定的络合物,再与甲醛和盐酸副玫瑰苯***作用,经分子
重排,生成紫红色配合物,于550nm处有最大吸收,测定其吸光度-以定量。
①分光光度计。
②分析天平。
③25ml具塞比色管。
⑴四******钠吸收液:***化高******化钠,溶于水中并稀释至1000ml,
放置过夜,过滤后备用。
⑵氨基磺酸铵溶液(12g/L)。
⑶甲醛溶液(2g/L)。
⑷淀粉指示液:称取1g可溶性淀粉,用少许水调成糊状,缓缓倾入100ml沸水中,随
加随搅拌,煮沸,放冷备用,此溶液临用时现配。
⑸亚铁***化钾溶液:***化钾[KFe(CN)·3HO],加水溶解并定容至
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100ml。
⑹乙酸锌溶液:称取22g乙酸锌[Zn(CHCOO)·2HO]溶于少量水中,加入3ml冰乙酸,
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用水定容至100ml。
⑺盐酸副玫瑰苯***溶液:***(CHNCl·4HO)于研钵中,加少
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量水研磨使溶解并定容至100ml。取出20ml,置于100ml容量瓶中,加盐酸(6mol/L),充分
摇匀后使溶液由红变黄,如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色,再加水定容至刻度,混匀备
用(如无盐酸副玫瑰苯***可用盐酸品红代替)。
盐酸副玫瑰苯***的精制方法:称取20g盐酸副玫瑰苯***于400ml水中,用50ml,盐酸
(2mol/L)酸化,徐徐搅拌,加4~5g活性炭,加热煮沸2min。将混合物倒入大漏斗中,过
滤(用保温漏斗趁热过滤)。滤液放置过夜,待出现结晶,再用布氏漏斗抽滤,将结晶再悬浮
于1000ml***-乙醇(10+1)的混合液中,振摇3~5min,以布氏漏斗抽滤,再用***反复
洗涤至醚层不带色为止,于硫酸干燥器中干燥,研细后储于棕色瓶中保存。
⑻碘溶液()。
⑼硫代硫酸钠标准溶液()。
⑽二氧化硫标准溶液:,溶于200ml四******钠吸收液中,放置过
夜,上清液用定量滤纸过滤备用。
二氧化硫标准溶液的标定:******钠溶液于250ml碘量瓶中,
加100ml水,(),5ml冰乙酸,摇匀,放置于暗处2min
后迅速以