文档介绍：西南国防医药年月第卷第期··
· 论著·
扩增中种提取法的比较
张云,陈凯锋,刘彬,张晓兵
摘要目的比较标准酚一氯仿、提取法、强碱法种提取法,研究哪种方法更简单方便,
更适合做甲基化特异性。方法分别用标准酚一氯仿、提取法、强碱法提取细
胞株中的,并对种方法提取的含量、纯度及所需时间进行比较。结果种方法提取的纯度和完
整性都较好,标准酚一氯仿法提取的含量最低,且最费时;强碱法提取的含量最高,并最省时。结论这
种提取法提取的都能够达到做的要求,比较而言,强碱法更具优越性。
关键词提取;甲基化;细胞株
中图分类号. 文献标识码
文章编号—.—:./..—...

,,, ,,,,
.
—,
‘. —
. .—,
,..
;—
.
. .
,.
;;
甲基化是一个为人所熟知的基因外遗传星公司;凝胶成像分析仪,—,法国;
信号,与肿瘤发生有着密切联系。甲基化状态细胞培养液,,进口分装。
改变是致癌作用的一个关键因素,是肿瘤抑制基因. 细胞培养细胞株西南医院中心实验
的失活方式之一,它通过基因机制和基因外机制导室提供在加有青霉素、链霉素、%小
致细胞增殖和分化的相关基因表达异常,造成细胞牛血清的高糖培养基,%:条件下
失去正常的基因调控而发生恶变形成肿瘤⋯。培养。当细胞处于对数生长期时回收、冻存。
甲基化状态的检测方法不多,现广泛用于甲基化检每次实验时取培养的细胞.×~.。个用
测的方法是甲基化特异性于提取。
, 。模板的纯度和含量在. 提取标准酚一氯仿提取法:具体步
扩增中至关重要,是扩增成败的重要因素骤见《现代分子生物学实验技术》。
之一。为了探讨提取的最优方法,笔者提取法:按试剂操作说明书进行。强碱法:
比较了标准酚氯仿、提取法和强碱法按照提取法,小心弃掉第二步所得全部
种提取法,发现强碱法是一种既简便、快速, 无色液相,得到中间相和下层红色有机相,按体积
又十分有效的提取方法。:的比例加入浓度为/的约,
轻轻反复翻动管,使其混匀,再准确加入倍体
材料与方法
积无水乙醇约,混匀后放置于冰上~
. 材料及设备分离试剂盒,购自罗氏生,使沉淀。℃/离心,
物试剂公司;紫外分光光度计,美弃上清。加入% 乙醇至管容积的/约
国—公司; 一电泳系统,上海复,混匀漂洗沉淀,/离心,
弃上清,空气干燥~。加一定量的
作者单位:.~. /个细
· · 西南国防医药年月第卷第期
胞加.~.。有未溶解物质时, 过程中,甲基化信号消失。是检测小剂量
在℃低速离心,将上清液移到另一管中, 甲基化状态的一种新技术,具有高敏感性,其检测的
各取稀释倍后紫外分光光度计测定提原理是:亚硫酸氢盐可选择性地将胞嘧啶变为尿嘧
取的在和处的吸光度,并计算啶,而甲基化的胞嘧啶却不发生变化,利用这种甲基
的浓度和/比值。化与非甲基化变化的差异,以亚硫酸氢盐处理过的
. 琼脂糖凝胶电泳取所提取的大约, 作模板,利用特异性的引物作,扩增产物
点样于.% 的琼脂糖凝胶里,电压电泳通过琼脂糖电泳或测序就可以检测基因是否
后,在紫外灯下观察结果,检测的完整性。发生甲基化。的完整性对于