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双向电泳技术在植物应答非生物胁迫蛋白质组学研究中的应用
程思思,乙弓,张习敏,马琛贵卅币范大学生命科学学院,贵州贵阳
,并对今后的发展进行了展望。
关键词双向电泳;蛋白质组学;非生物胁迫
中图分类号文献标识码文章编号—一一
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植物在生长发育过程中会遭遇高温、低温、干旱和高盐术的完善,逐步替代了,发展成—固相
等各种非生物逆境胁迫。植物感受这些逆境信号后通过信梯度一道尔顿。
号转导过程调节细胞内抗逆性相关蛋白的表达,进而调整自目前,随着蛋白质组研究的不断发展,双向电泳技术凭
身的生理状态或形态来提高其对非生物逆境的耐受能力。着其高通量、高灵敏度、高分辨率、重复性好、便于计算机进
目前已有许多通过筛选、鉴定植物抗逆性基因以提高植物抗行图像分析处理等其他蛋白质分离技术所无法比拟的优势,
逆性研究的报道,都是从细胞的角度来考虑的。但实已经成为蛋白质组学研究领域中不可或缺的实用技术之一,
际上蛋白质复杂的翻译后修饰、蛋白质的亚细胞定位或迁越来越受到大家的关注。
移、蛋白质一蛋白质相互作用等几乎无法从水平来判双向电泳技术在植物应答非生物胁迫蛋白质组学研究中
断。而通过蛋白质组学的研究,能够更好的反映植物应答的应用
非生物胁迫中相关蛋白在时间、空间、数量、活性等方面的差. 在植物应答高温胁迫蛋白质组学研究中的应用植
异。因此,对于植物应答非生物胁迫蛋白质组学的研究及双物体在受到高温逆境刺激后可诱导大量热休克蛋白的表达,
向电泳技术的应用越来越受到人们的关注。这些蛋白是植物对逆境胁迫短期适应的必需组成成分,对减
双向电泳·技术概况轻高温胁迫引起的伤害有很大的作用。和
双向电泳是通过次凝胶电泳达到分离蛋白质群的技对烟草进行热激处理后,通过技术分析其叶肉
术,第一向为等电聚焦,即根据蛋白质的等电点差异将原生质体蛋白质组,发现某些蛋白的合成几乎不受影响,而
蛋白质分离;第二向为十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电某些在被检测出的蛋白质在热激处理后合成量明显减
泳—,即根据蛋白质的分子量差异将蛋白质分离。少,另外还新诱导出个特异性热激蛋白。.
双向电泳分离得到的每个斑点都对应着样本中的种蛋白, 等通过技术分析了热激下玉米线粒体蛋白质组的变
是唯一能将样本中余种不同的蛋白质同时分离开来, 化,发现热激下和的合成无明显变化,而一种
并得到每种蛋白质的等电点、表观分子量和含量等信息的分特殊的—合成受到高温强烈诱导,从而研
离技术。其技术流程主要包括样品制备、第一向及胶究了合成与耐热性的关系。魏令波等用双向电泳一
条平衡、.、蛋白检测与图像扫描分析等步骤。电泳回收法从沙冬青叶片热稳定蛋白质中分离到一种抗冻
双向电泳技术自诞生以来,一直在不断的改进。年蛋白,其分子量为,为.,热滞活性为.℃
’首先提出双向电泳系统,首先将载体两性电解/,与其他抗冻蛋白进行比较,没有发现相同的类
质添加在丙烯酰胺凝胶中,凝胶聚合后在电场作用下型。在沙冬青体内广泛分布且叶片含量较高,可能是沙
形成连续的梯度进行等电聚焦作为第一向;聚焦后的凝冬青抗