文档介绍：该【DNS法测还原糖 】是由【小sjj】上传分享，文档一共【6】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【DNS法测还原糖 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范实验
围内反应的还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系,可测定生成化合物的
吸光度,由标准曲线反推出还原糖的浓度。操作简便,快速,杂质干扰较少,适于生物制氢
中还原糖含量的测定。
显色条件包括:
波长选择,显色剂用量,显色时间,溶液酸度,显色温度,有机络合物的稳定性及共存离子
的干扰等。此次实验选择波长选择,显色剂用量,显色时间,溶液酸度进行实验。
DNS试剂:,加热,
3,5-二硝基水杨酸(DNS),另配制2mol/lNaOH溶液,,称量0.
,蒸馏水定容至100ml,该试剂避
光保存7~10天。
葡萄糖标准溶液(*10-2mol/l):,待溶解后定容至100ml
容量瓶中。
葡萄糖标准溶液(*10-3mol/l):取10ml10-2mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。
葡萄糖标准溶液(*10-4mol/l):取10ml10-3mol/l溶液,稀释至100ml容量瓶中。
,沸水浴15min,均加入7ml水定容为1
0ml,流水冷却,在不同波长处分别进行扫描。
图1为不同条件下溶液的波长——吸光度图(水调零)。由图1可以看出白色
与绿色曲线几乎重合,,用
比色法很难区分,。
由DNS+H2O曲线可以看出当波长大于530nm时,DNS的吸光度已经很小,这时DNS对
反应生成的氨基化合物吸光度的影响可以忽略。
3DNS+HO
2
DNS+10-3mol/lglucose
DNS+10-4mol/lglucose
A2amide
1
0
440460480500520540560580
图2为4号试管稀释10倍后波长扫描图
4号试管用高浓度的葡萄糖溶液和少量的DNS试剂反应,使生成大量的氨基化合物,
但其吸光度太大,仪器无法测定,故将其稀释10倍。以水调零未出现最高峰,以DNS调零
时(图2)在540nm处有最高峰,这说明在该浓度下,DNS可能会对氨基化合物吸光度的测
量有较大影响,故测量时以DNS调零较准确。选择540nm作为最佳吸收波长。
510520530540550560570
,沸水浴30min,加入适量水使定容为10ml,流
水冷却,以1号试管中DNS溶液为参比,在540nm处测吸光度。
试01234567
管
号
S/m
l
水31
/ml
11*00111111
10-
4mo
l/l
葡
萄
DNS试剂(—)
称取3,5-(化学纯),加水500ml,搅拌5s,水浴至45℃.然后逐步加入100ml
氢氧化钠溶液(),同时不断搅拌,直到溶液清澈透明(注意:在加入氢氧化钠过程中,溶液温
度不要超过48℃.).,
45℃水浴加热,同时补加水300ml,不断搅拌,,冷却至室温
后,,储存在棕色瓶中,
放7天后可以使用,有效期为6个月.
DNS试剂(二)
只有3,5-二硝基水杨酸,氢氧化钠,酒石酸钠钾三种物质。
PS:网上找的,有抄袭嫌疑,不用给币了:D
其中酚为蛋白质变性剂,具有强腐蚀性,不同配方用量也不一样,若用,当小心,,,
hitzbz(站内联系TA)
-300ml去离子水
(丙三)醇
三者混合定容至1000ml即可。
标线做法:
标液浓度:
,,02,,,,,,,,
与一定量的去离子水,
,沸水10min
冷却后,
,测定即可得标准曲线
DNS溶液测糖含量
分类:实验基础知识
:20:sunsaley|评论:0|阅读:2451
仪器和设备
分析天平:感量。.lmg;
恒温水浴锅可控温40士1C;
721分光光度计;
容量瓶:100mL;
移液管:ImL,2mL,lOMI。
C5试剂和溶液
%(v/v)磷酸盐缓冲液(pH=):
溶解1g3一二硝基水杨酸、,5。2g苯P,、glg氢氧化钠、20g酒石酸钾钠
于蒸馏水中
并加热,冷却定容到100m1_,贮于棕色瓶内,一周后用于作标准曲线(每次配制后要重新作标
准曲线)。
%(m/m)淀粉缓冲液
溶解1g可溶性淀粉于煮沸的蒸馏水中,再煮沸Imin,冷却,加lOmL1磷酸盐缓冲液再0%
用蒸馏
水定容到99mL(用量筒定容)。
C6标准曲线的绘制(采用DNS半量法)
准确称取在105^-110C’干燥后的葡萄糖50mg,用蒸馏水溶解定容到50mL,即为lmg/mL
葡萄糖
液,按下表比例在试管中操作后,开小火煮沸15min,冷却,,在I721分
光光度计
550nm波长处比色,。
第一列编号
mg
第二列lmg/mL糖液量
mL
第三列蒸馏水量
mL
第四列DNS量
mL
第五。
以读出的光密度值()为横坐标,含糖量为纵坐标,作出标准曲线