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体内药物分析复****题..
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一、简述与常例药物分析比较,体内药物分析有哪些特色。
体内药物分析,是一门新兴学科,是药物分析的重要分支,也是现代药学的创新、延长和发展。体内药物分析旨在经过各样分析手段,认识药物在体内的数目与质量变化,获取药物动力学的各样参数、药物在体内的生物转变、代谢方式和门路等信息。与常例药物分析比较,体内药物分析有以下特色:
1、搅乱杂质多,样品一般需经过分别、净化才能进行分析。
2、样品量少(ng/ml-ug/ml),不易从头获取,在测定前需要浓缩、富集。
3、药物浓度低,对分析方法的敏捷度和专属性要求高。
4、要求较快供给结果(临床用药监护,中毒挽救等)
5、要有能够进行复杂样品分析的设施如GC-MS、HPLC等。
6、工作量大,测定数据的办理和结果的说明不太简单。
二、简述常用生物样本的种类及采集、积蓄方式。简述生物样品测定
前除蛋白质的原由及常用方法。
1、血液
采集:待药物在血液中散布平均后取样,从静脉采血。
制备:血浆(plasma):全血+抗凝剂(肝素等)—离心—上清液(淡黄色)
血清(serum):全血静置一段时间—离心—上清液(淡黄色)
全血(wholeblood):全血+抗凝剂(肝素等)—混淆
积蓄:采血后即便分别,不超出2h,分别后置于冰箱或冷冻柜中保留;若不予先
分别,血凝后冰冻保留;短期4℃,长久-20℃。
2、尿液:尿中药物以原型、代谢物或缀合物形式存在。
采集:自然排尿,常用涂蜡的一次性纸杯或玻璃杯
制备:尿液加入适合的防腐剂于储尿瓶
积蓄:主要成分是水、尿素、盐类,易长细菌,短期可置4℃冷藏或加防腐剂,
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若保留时间长则需冷冻(-20℃)保留。
3、唾液
采集:漱口15min后,用插入漏斗的试管采集口内自然流出或经舌在口内搅动后
流出的混淆唾液采集时间最少10min制备:唾液除去泡沫部分—搁置分层
—离心—上清液。
制备:唾液出去泡沫部分—搁置分层—离心—上清液
积蓄:4℃以下保留冷冻的样品测准时需解冻冷冻,最好一次性测定完成,不要
频频冷冻--解冻--冷冻--解冻,免得药物含量降落。
样品的积蓄除了上述的冷冻积蓄,还包含:
1、加坚固剂:酶控制剂:NaF,四氢尿苷,三***醋酸;
抗氧剂:维生素C等
2、防腐剂、改变pH值
尿样中可加入的防腐剂有:甲苯、***仿等或加无机酸、碱等调理尿液pH值。
除蛋白质的原由:
1、使联合型药物开释出来,以测定总浓度。
2、获取较“洁净”的提取液,减少乳化。
3、除去对测定的搅乱。
4、保护仪器,延长使用限时。
常用去蛋白质方法:
1、蛋白质积淀法——生成不溶性盐或盐析和脱水作用。包含:加酸类、重金属
盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等,如:三***乙酸、高***酸、Cu2+、硫酸铵、
甲醇、乙***等。
2、组织酶消化法——蛋白水解酶,如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。
三、简述体内药物分析方法确实证的内容。论述定量限与检测限的定
义及差异、表示方法。
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分析方法的考证,就是对药品分析实验所采纳的分析方法能否完满达到了预
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期目的,或证明由分析方法偏差而致使试验结果判断错误的概率能否在赞成范围以内,而进行的科学证明。分析方法的考证以考证参数表示:
1、专属性(Specificity):专属性是指在一些可能存在的组分如杂质、降解产
物、基质等的存在下,对被分析物质的正确靠谱的测定。
2、正确性(Accuracy):正确性指的是真切值或认同的参照值与丈量值之间周边
程度。
3、精巧度(Precision):精巧度指的是规定条件下对同一匀质样品多次取样进行
一系列检测结果的一致程度(失散程度)。精巧度能够从三方面考虑:重复性、中间精巧度、重现性。分析方法的精巧度平常以丈量法的变异性、标准偏差或变异系数来表达。
4、重复性(Repeatability):重复性是指在相同的操作条件下较短时间间隔的
精巧度,也称为日内差(Intra-assayprecision)。
5、中间精巧度(IntermediatePrecision):中间精巧度指的是试验室内部条件
改变(如:不一样样天、不一样样分析测试者、不一样样仪器等)状况下的精巧度。
6、重现性(Reproducibility):指不一样样试验室之间的精巧度,常用于合作
试验研究(collaborativestudies)中的方法学的标准化研究。
7、检测限度(Detectionlimit):检测限度指的是样品中的被分析物质能够被检
测到的最低量,平常无需定量。
8、定量限度(Quantitationlimit):某种分析方法的定量限度是指拥有适合正确性和精巧度的条件下,能够定量测定分析组分的最低限量。它是样品中含量低的化合物定量分析的参数,特别合用于杂质和(或)降解产物的测定。
9、线性(Linearity):分析方法的线性是指所得检测结果与样品中被分析物的浓
度(含量)成比率关系的性能。
10、范围(Range):析方法的范围是指在样品中被分析物的较高浓度(量)和较低
浓度(量)之间的区间、已证明区间内拥有适合的正确性、精巧度、线性。11、耐用性(Robustness):分析方法的耐用性是指试验参数适合地发生细小改变
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时,丈量能力保持不受影响,可用于说明正常使用时的靠谱性。
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定量限:是指样品中被测物能被定量测定的最低量,其结果应拥有必然的正确度
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和精巧度。
检测限:是指分析方法在规定的实验条件下试样中被测物能够被检测出的最低
量。
差异:定量限所规定的最低浓度应知足必然的精巧度和正确度的要求。
定量限:信噪比3:1
检测限:信噪比10:1
四、简述基质效应产生的原由、影响、确认方法以及除去。
原由:标本中除分析物之外的其余成分对分析物测定值的影响,惹起基质效应的要素相当复杂,波及实验的多个部分:仪器设计、试剂构成、方法原理,以及质控物、定标物和PT资料的成分和办理技术。
与标准样品和QC样品比较,生物样品在进行液相色谱-电喷雾电离-质谱法分析时,会产生显然的基质效应。
产生于生物样品中的内源性物质、代谢产物或一起服用的其余药物,因在色谱分析中与目标化合物分别不完满或未被检测到而进入质谱后产生基质效应。影响:基质效应会使分析物的测定值发生改变,数值或偏大或偏小。
而在生物样品(以血浆为例)中,惹起基质效应的主假如磷脂、胆固醇等
内源性物质。他们伴同待测物从色谱柱上一起被洗脱出来,经离子源气化,进入
质谱进行检测分析。而就在液滴气化、发生库伦爆炸变为小液滴直至产生气体离
子的过程中,这些内源性的物质因为极性较大,会同待测物离子竞相竞争液滴表
面,进而致使待测物的离子化效率降低或加强,惹起响应降低或增高,这就产生
所谓的基质控制或基质加强效应
基质效应确实认方法:
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1、标准曲线法
2、柱后灌输法
3、监控法
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基质效应的除去:
1、选择适合的样品制备方法——最有效。
2、改良色谱分析条件
3、优化质谱分析条件
4、内标的选择
五、比较比色法、紫外法、荧光法的异同点。
1、比色法:以可见光作光源,比较溶液颜色深浅度以测定所含有色物质浓度的
方法。
2、紫外法:可见光、紫外线照耀某些物质,主假如因为物质分子中价电子能级
跃迁对辐射的汲取,而产生化合物的可见紫外汲取光谱。
3、荧光法:利用某些物质被紫外光照耀后所发生的能反应出该物质特色的荧光,
可进行定性或定量分析的方法。
相同点:1、都以朗伯-比尔定律(A=εbc)为基础。
2、都属于光谱分析法,操作简单、迅速。
3、定量方法采纳标准曲线法和标准比较法。
不一样样点:1、光源:比色法使用的是混色光源,紫外法使用的是单色光源。
2、比色法使用的是色阶和人的眼睛,相对偏差较大,紫外法和荧光法
使用的是仪器和光电检测器,相对偏差较小
3、比色法主假如定性的,而紫外法和荧光法是定量、定性
4、实质:紫外法为汲取光谱;荧光法为发射光谱。
5、敏捷度:荧光法10-10-10-1;紫外法10-4-10-72;比色法较低
、选择性:紫外和比色法一般;荧光高
7、应用:荧光法的应用没有紫外广。
六、紫外法详细有哪些方法?基本源理怎样?
1、差示分光光度法
原理:利用被测物在两种不一样样溶液中汲取光谱发生了特***变化,而共存搅乱物
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在该两种溶液中未惹起光谱变化,测定两种溶液的汲取度差值(A值),依据
A与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。
应用条件:必然使被测物在两种溶液中以不一样样的化学形式存在,且两种化学形式
的汲取光谱应有显然差异。依据被测物理化性质,可选择不一样样的办理方法,除酸、
碱外,还可用缓冲液、氧化剂等。但应使被测物在一种溶液中以一种形式存在,
光谱纯度不低于99%。
2、双波长法:主要用于二元混淆物或污浊样品的测定。
原理:在测处:A测=A样+A杂
在参处:A参=A’样+A’杂
⊿A=A测—A参=(A样+A杂)—(A’样+A’杂)
因为:A杂=A’杂
所以:⊿A=A样—A’样,与搅乱物没关。
应用条件:
测——被测物汲取峰周边
参——搅乱物在测处的等汲取点,即搅乱物在此两波优点A值相等
3、导数光谱法
原理:假如搅乱汲取随波长呈线性时,可用直线方程表示A混=E测·C测·L+a+
bλ,对上述公式求导:dA混/dλ=dE测/dλ·C测·L+b,搅乱物质的汲取由随波
长呈线性变为了常数。
关于非线性搅乱,可近似地用二次曲线表示A=E·C·L+t+uλ+wλ2,对上式求二
阶导数,可使杂质搅乱的二阶曲线t+uλ+wλ2变为常数w,进而除去搅乱。
应用条件:依据搅乱物质的汲取光谱图形,选择导数阶数
七、免疫分析的基本源理、基本条件是什么?常用免疫分析有哪几
种?互相间差异在哪些方面?
免疫分析的基本源理是抗原-抗体的联合反应,当抗原碰到其相应的特异抗体时
产生一系列的抗原-抗体反应,形成抗原-抗体联合物。
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基本条件:特异性抗体、标志抗原、未标志抗原(即标准品)。
常用免疫分析有:放射免疫分析法,酶免疫分析法,化学发光免疫分析法,荧光免疫分析法。
差异:标志物不一样样,由此采纳的方法也不一样样。
1、放射免疫分析是放射性同位素测定法与免疫反应基本源理相联合的一种同位素分析技术。该法拥有敏捷度高、特异性强、标志物简单制备以及放射性强度简单检测等优点,特别适合复杂样品中微量或痕量物质的分析。
2、酶免疫分析的基本源理是在抗体或抗原分子上连结酶分子,进行免疫反应,免疫复合物上的酶将特定的底物转变为特定的颜色,用分光光度计测定,由颜色的深浅确立待测物的量,其催化底物可与核素相同起到信息放大作用,拥有很高的敏捷度,检测下限可达到ng甚至p***平,有效期大大超出了125I
标志物,并且能减少放射性废物。
3、化学发光免疫分析法:所需时间短、敏捷度高、线性范围宽、对环境无污染,荧光免疫分析是以荧光物质作为标志物与待测药物联合,所形成的荧光标志药物能与抗体发生免疫反应,惹起荧光强度发生变化的一种分析方法。
八、测定药物与蛋白质联合率的意义安在?测准时需注意什么问题?
药物血浆蛋白联合率一般是指在治疗量时药物联合的百分率,它是药物代谢动力学的重要参数之一,是新药临床谈论不能够缺乏的指标。它影响药物在体内的散布、代谢与排泄,更重要的是它与药物的药理作用强度亲密有关。血浆蛋白联合率高的药物,即便有高的血药浓度,而发挥作用的游离药物的浓度其实不高,药理作用就不用然强。所以,若没有血浆蛋白联合方面的资料,就不能够能谈论血药浓度的真切意义。
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