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基因工程基本操作的四个步骤
1、目的基因的获取
2、基因表达载体的构建
3、将目的基因导入受体细胞
4、目的基因的检测与鉴定
一、目的基因的获取
1、目的基因主要是指______________________
编码蛋白质的结构基因
也有一些具有调控作用的因子
2、获取目的基因的方法
(1)从基因文库中获取
(2)利用PCR技术扩增
(3)人工合成
________________________________________
①概概念念::PCR全全称称为为_______________,,是是一一项项
在生生物物____复复制制___________的的核核酸酸合合成成技技术术
③条条件件::___________、、_______________、、___________、、___________、__________
②原理::__________
聚合酶链链式反应应
体外
特定DN***段段
DNA复复制
模板DNA
四种脱氧氧核苷酸酸
DNA引引物
热稳定DNA聚聚合酶
(二)利用PCR扩增增目的基基因
④方式::以_____方式扩扩增,即即____(n为扩增增循
环的次数数)
⑤结果::_______________________________________________________
指数
2n
使目的基基因的片片段在短短时间内内大量扩增
⑥过程
a、变性性(90℃℃-95℃)::双链DNA模模板
在热作用用下,_____断裂裂,形成成___________
b、复性性(复性55℃-60℃℃):系系统温度度降低,,引物物与DNA模板板结合,形成局局部________。
c、延伸伸(70℃℃-75℃)::在Taq酶的的作用下下,
合成与模模板互补补的________。
氢键
单链DNA
双链
DNA链链
⑦前提__________________________________________________
有一段已知知目的基基因的核核苷酸序序列
蛋白质的的氨基酸酸序列
mRNA的核苷苷酸序列列
结构基因因的核苷苷酸序列列
推测
推测
目的基因因
化学合成成(DNA合成仪仪)
(三)人人工合成成
若基因_____,核核苷酸序序列______,,可用此此法。
较小
已知
(化学合合成法))
mRNA
cDNA单链
cDNA分分子
逆转录录酶
DNA聚合合酶
(三))人工工合成成
(反转录录法)
与直接提提取的DNA相相比cDNA不不含有_____
和_____等结构。。
真核生物物mRNA的形形成
编码区
非编码区区
RNA聚聚合酶结结合位点点
非编码区区
转录
加工(剪剪切、拼拼接)
成熟mRNA
只对应外外显子部部分
初级转录录物
补充资料料
a、使目目的基因因在受体体细胞中中稳定存存在
并遗传给子代代
b、同时使目目的基因能表表达和发挥作作用
1、基因表达载载体的构建目的
二、表达载体的构构建
2、基因表达达载体的组成成:
目的基因
标记基因
启动子
终止子