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台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理
台盼蓝(TrypanBlue)是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量:,可溶于水(10mg/ml)。
实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后,通过显微镜下或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。
实验步骤:
1、配制4%台盼蓝:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。使用时用PBS稀释至%。
2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。
3、染色:细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。(终浓度%)
4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力:活细胞率(%)=活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
注意:
:室温保存。
,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。