文档介绍：该【现代微生物学实验技术 】是由【wxq362】上传分享，文档一共【14】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【现代微生物学实验技术 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。绿色糖单孢菌的发酵 及胞外酶的提取
北京林业大学生物科学与技术学院
2012-10-20
第一页,共十四页。
试验目的
了解发酵应用的广泛性
了解利用发酵罐进行高密度培养的技术
掌握发酵罐的使用原理和方法
掌握酶活测定方法
第二页,共十四页。
试验原理
绿色糖单孢菌(Saccharomonosporaviridis)是一种耐热耐碱的放线菌,产胞外木素过氧化物酶、木聚糖酶、纤维素酶。
发酵:微生物把一些原料养分在合适的发酵条件下经特定的代谢途径转变成所需的产物的过程。
影响发酵的条件:培养基成分、温度、诱导时机及诱导剂、溶解氧、pH等。
第三页,共十四页。
实验材料
菌株:绿色糖单孢菌(Saccharomonosporaviridis)
培养基
种子培养基:大豆蛋白胨1%、%、%、%、葡萄糖1%
发酵培养基:%xylan
~
灭菌温度:115℃,30min
第四页,共十四页。
试验方法
步骤:
第五页,共十四页。
数据分析
生长曲线及产酶曲线
木聚糖酶的比活(包括木糖标准曲线、蛋白含量标准曲线等)
第六页,共十四页。
生长曲线及产酶曲线
生长曲线测定:
在发酵培养过程中,从接种后每6h取样(3ml),测定其在OD600条件下的吸光度值,至发酵结束。
以同条件下未接种培养液为空白对照,培养时间为横坐标,菌液的OD600吸光度值为纵坐标绘制绿色糖单孢菌在的生长曲线。
产酶曲线测定:
在发酵培养过程中,从接种后每6h取样(2ml),分别测定其木聚糖酶和纤维素酶的比活。
第七页,共十四页。
木聚糖酶活测定方法
制作木糖标准曲线。
⑴用PH7的磷酸缓冲液分别配制浓度1mg/mL的木糖溶液。
⑵取十支带有刻度的25mL试管,分别吸入0,,,,,,,,,。
⑶加入磷酸缓冲液,。
⑷,在沸水中反应5min,反应后迅速冷却至室温。
⑸向每支试管中加入10mL蒸馏水,在540nm处测定溶液的吸光值。
第八页,共十四页。
木聚糖酶活测定方法
酶活测定方法:
粗酶液稀释10倍作为待测酶液;
用pH7的磷酸缓冲液配制得到1%的木聚糖溶液作为木聚糖酶的底物,,,于60℃下水浴20min,加入1mLDNS试剂,在沸水中煮5min,冷却后加蒸馏水10mL混匀后,540nm处测定其吸光度。
第九页,共十四页。
蛋白含量测定方法
考马斯亮蓝G-250法蛋白质浓度
1
2
3
4
5
6
样品蛋白
ml
(c=)
0
蒸馏水
ml
0
考马斯亮蓝G-250
ml
5
5
5
5
5
5
蛋白含量μg
0
20
40
60
80
100
第十页,共十四页。