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原理和方法
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一、电泳方法的分类
按支持物的物理性状不同,区带电泳可为:
滤纸及其他纤维(如醋酸纤维、玻璃纤维、聚氯乙烯纤维)薄膜电位;
粉末电泳,如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳;
凝胶电泳,如琼脂、琼脂糖、硅胶、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶等;
丝线电泳,如尼龙丝、人造丝电泳。
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按支持物的装置形式不同,区带电泳可为:
平板式电泳,支持物水平放置,是最常用的电泳方式;
垂直板式电泳,聚丙烯酰胺凝胶常做成垂直板式电泳;
垂直柱式电泳,聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳即属于此类;
连续液动电泳,首先应用于纸电泳,将滤纸垂直竖立,两边各放一电极,溶液自顶端向下流,与电泳方向垂直。
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概念:以琼脂糖凝胶作支持体的电泳方式。
二、琼脂糖凝胶电泳
天然琼脂(agar):又名琼胶、菜燕、冻粉,从石花菜及其它红藻类植物提取出来的一种线状高聚物。
琼脂糖(agarose)
琼脂胶(agaropectin)
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琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型凝胶。
D-半乳糖
3,6-脱水-L-半乳糖
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琼脂糖凝胶电泳的缺点:
(1)机械强度差,易破碎,浓度不能太低。
(2)易被细菌污染,不易保存,临用前配制。
(3)琼脂糖支持层上的区带易于扩散,电泳后必须立即固定染色。
(4)与PAGE相比,分子筛作用小,区带少。
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琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要依据它们的相对分子质量及分子构型,同时与凝胶的浓度也有密切关系。
三、DNA的琼脂糖凝胶电泳
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(2)琼脂糖的浓度:
不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离,如下表所示:
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