文档介绍：临床医学检验新技术
荧光定量PCR
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
技术原理:将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得CT值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
临床应用:各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价;地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测;肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断;遗传基因检测实现遗传病诊断。检测种类涉及多种病原体,从细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体、螺旋体到寄生虫。
流式细胞术
流式细胞术(FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,与传统的荧光镜检查相比,具有速度快、精度
高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术。
技术原理:将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱,后者与入射的激光束垂直相交,液柱中的细胞被激光激发产生荧光。仪器中一系列光学系统(透镜、光阑、滤片和检测器等)收集荧光、光散射、光吸收或细胞电组抗等信号,计算机系统进行收集、储存、显示并分析被测定的各种信号,对各种指标做出统计分析。
临床应用:可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定,以及免疫学研究,并已开始用于细菌鉴定,病毒感染细胞的识别和艾滋病感染者T4、T8细胞的记数。
FCM通过荧光抗原抗体检测技术对细胞表面抗原分析,进行细胞分类和亚群分析。这一技术对于人体细胞免疫功能的评估以及各种血液病及肿瘤的诊断和治疗有重要作用。目前FCM用的各种单克隆抗体试剂已经发展到了百余种,可以对各种血细胞和组织细胞的表型进行测定分析。
一、在血液病诊断和治疗中的应用
FCM通过对外周血细胞或骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析,对白血病等各种血液病的诊断、预后判断和治疗起着举足轻重的作用。
二、在血栓与出血性疾病中的应用
FCM可以通过单抗免疫荧光标记(血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa,CD62,CD63等)监测血小板功能及活化情况,有利于血栓栓塞性疾病的诊断和治疗。而用
FCM测定钙离子浓度,可以作为活化血小板监测的非免疫性指标。
FCM可以测定血小板相关抗体含量,用于诊断及治疗监测,具有检测速度快、灵敏度高的优点。
酶联免疫分析技术
酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)技术自20 世纪70年代初问世以来,发展非常迅速,目前被广泛应用于免疫学、医学、生物学等许多领域。ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
技术原理:酶联免疫吸附试验是一种固相免疫测定技术,其先将抗体或抗原包被到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。测定时,将待检样本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,后加入酶标抗体与免疫复合物结合,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离的未结合成分,最后加入酶反应底物,根据底物被酶催化产生的颜色及其吸光度(A)值的大小进行定性或定量分析的方法。
根据检测目的和操作步骤不同,有双抗体夹心法、间接法、竞争法三种类型的常用方法。
临床应用:ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。
1、病原体及其抗体的检测病毒感染如肝炎病毒,巨细胞病毒,风疹病毒,疱疹病毒,轮状病毒,艾滋病病毒(
HIV)等。细菌感染如链球菌,布氏杆菌等。寄生虫感染如阿米巴、弓形虫、锥虫等。
2、蛋白质如各种免疫球蛋白,肿瘤标志物如甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺碱性磷酸酶,激素如hCG, FSH, TSH, hGH, 酶如肌酸激酶-MB,其他蛋白质如铁蛋白等。
3、非肽类激素如T3, T4,雌二醇,皮质醇等。
4、药物治疗心脏病药物如***,抗哮喘药物如茶碱,抗生素如庆大霉素等。
免疫印迹技术
免疫印迹法(Western blotting) 是一种将高分