文档介绍：免疫分析方法20070321
免疫学反应原理
单扩散
琼脂糖凝胶平板→打孔→点加样本→孵育(过夜) →观察沉淀线
可以定性,也可以定量应用:检测抗原抗体。如免疫球蛋白测定
双扩散
琼脂糖凝胶平板→打孔(两两对应)→点加样本及对应抗原或抗体→孵育(过夜) →观察沉淀线
一般用于定性,也可观察抗原抗体有无交叉反应。如抗原抗体的鉴定
免疫沉淀
在试管中加入抗原及抗体,混匀后孵育,观察沉淀的出现
环状沉淀:毛细管内进行。如链球菌的血清学分型
对流电泳
操作类似于双扩散。但在两侧施加电场,以加快免疫反应的速度。
适用于抗原抗体检测。如乙肝表面抗原的检测
火箭电泳
类似于单扩散,但外加了电场,孔内所加抗原向一特定方向迁移,且迁移沉淀线的长度与抗原的浓度成正
比,故可以定量。如甲胎蛋白的检测。
血球凝集试验
将抗体或抗原结合在动物红血球(羊、牛、兔等)上(致敏),当致敏的红血球与相应抗原或抗体相遇时,发生肉眼可见的凝集。也可制备反向血凝或血凝抑制试验。
血球在致敏前需要进行处理(鞣化),使之不易破坏,也更容易致敏。
如乙肝表面抗原的检测:成本低廉,检测灵敏度也高。
乳胶凝集
原理同血球凝集试验,但致敏的是乳胶颗粒,且试剂更易保存。如细菌抗原的快速检测试剂。补体结合试验
在抗原抗体反应的体系中加入新鲜制备的补体(豚鼠)以及指示系统(红细胞),当有相应的抗原抗体存在
并发生反应时,激活补体,红细胞溶解。若加入与人体的被测抗体相竞争的抗体时,被测抗体消耗掉大量抗原,而无能与指示系统中的抗体反应的抗原剩余,补体不被激活,红血球不被溶解:补体结合抑制试验。如抗链O检测
金标记试验
以胶体金致敏抗原,当遇相应抗体时,与之结合并吸附在支持介质上,浓集后形成可见的红色。一般用于快速试验,卡片式的反应体系方便易用。但敏感性和特异性不足。
也有用胶体硒的。如表面抗原、抗HIV等
免疫斑点试验
原理与金标记法类似,但标记的是酶,在抗原抗体结合后,标记在上面的酶可催化随后加入的显色系统,
以出现黑色斑点为阳性。
免疫印迹
先将微生物抗原电泳分离,再通过免疫转印技术将琼脂上的抗原转染到***纤维膜上并固定(可裁成小条供多个检测用)。测定时加入人血清,血中抗体与膜上的抗原结合,再加入标记的抗体或生物素系统,最后是显色。与相应特异抗原结合的位置上的显色即代表了有对应该相应抗原的抗体。特异性较高。
如:抗HIV检测
免疫比浊
原理是在一定的反应体系中,抗原抗体的反应速度与其浓度相关。测定体系中抗原抗体反应所引起的浊度
变化速率即可间接测定体系中抗原或抗体的浓度。一般用于全自动的免疫分析仪。如免疫球蛋白的检测。放射免疫
一般为竞争法:以放射性元素标记抗原,与待测抗原共同竞争与同时加入的抗体的结合,待测抗原越多,与抗体结合的标记抗原越少,存留的放射性就越低。
抗原的标记:琥珀酸酐法、O-(羧***)羟***法
放射性元素的选择:碘125、碘131、氢3等。检测放射性:γ计数仪
酶免试验
方法可有三明治夹心法、竞争抑制法、间接法、捕获法。
首先用抗体或抗原包被酶标板,加入待测标本,再加入用酶标记的抗原或抗体,也可以同时加入竞争的抗原或抗体,经过