文档介绍：该【外源基因的原核表达】是由【niuww】上传分享，文档一共【118】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【外源基因的原核表达】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。外源基因的原核表达
第1页/共118页
2023年2月26日星期日
2
外源基因的原核表达
第2页/共118页
2023年2月26日星期日
3
外源基因表达的作用:外源基因表达泛指目的基因与表达载体重组后,导入合适的受体细胞,并能在其中有效表达,产生目的基因产物。外源基因的表达是研究和探索基因功能、基因表达调控机制、编码蛋白质的结构与功能的重要方法,也是制备和生产新型蛋白质药物、诊断试剂必不可少的手段。通过外源基因的表达可由宿主细胞产生大量的目的蛋白。
第3页/共118页
2023年2月26日星期日
4
常用的原核外源表达系统
大肠杆菌表达系统
芽孢杆菌表达系统
链霉菌表达系统
蓝藻表达系统
第4页/共118页
2023年2月26日星期日
5
原核生物基因表达系统的特点:
1、原核生物大多数为单细胞异养,生长快,代谢易于控制,可通过发酵迅速获得大量基因表达产物。
2、基因组结构简单,便于基因操作和分析。
3、多数原核生物细胞内含有质粒或噬菌体,便于构建相应的表达载体。
第5页/共118页
2023年2月26日星期日
6
原核生物基因表达系统的特点:
4、不具备真核生物的蛋白质加工系统,表达产物无特定的空间构象。
5、内源蛋白酶会降解表达的外源蛋白,造成表达产物的不稳定。
由于以上特点,近年来真核生物表达系统发展很快,并构建了相应的基因表达载体。
第6页/共118页
2023年2月26日星期日
7
大肠杆菌表达系统
大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早,目前应用最为广泛的经典表达系统。属革兰氏阴性细菌。其特点是:
遗传背景清楚
目的基因表达水平高
培养时间短
第7页/共118页
2023年2月26日星期日
8
大肠杆菌表达系统的主要不足
1、缺少真核生物的蛋白质翻译后修饰和加工过程。
2、表达的蛋白质多以包含体形式存在,需经复性才能恢复构象与活性
3、宿主本身杂蛋白质多,纯化步骤复杂。
第8页/共118页
2023年2月26日星期日
9
大肠杆菌基因表达载体
理想的大肠杆菌表达载体的特征
1、稳定的遗传和复制能力,在无选择压力下保存于大肠杆菌细胞内
2、具有显性的转化筛选标记
3、转录可以调控,抑制时本底转录水平较低
4、转录的mRNA能够在适当的位置终止且转录不影响载体的复制
5、具备适用于外源基因插入酶切位点
第9页/共118页
2023年2月26日星期日
10
大肠杆菌基因表达载体构成
1、复制子:是一段包含起始位点和反式因子作用区在内的DN***段。其功能是通过复制使载体稳定存在于大肠杆菌细胞。
第10页/共118页