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外界因素对酶活性的影响
一、实验目的
。
。
 二、实验原理
酶的化学本质是蛋白质,它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质,因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、pH、酶浓度及某些离子浓度等变化很敏感。
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(一)pH值对酶活性的影响
酶的活性受环境pH的影响极为显著,通常各种酶只有在一定的pH范围内才能表现它的活,一种酶表现其最高活性时的pH值称为该酶的最适pH。高于或低于最适pH值时,酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。
(二)温度对酶活性的影响
每种酶都有其最适温度,高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言,酶处于过高的温度环境中,会使酶活性永久地丧失;而处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制,一旦温度适宜,酶又会全部或部分地恢复其活性。
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(三)酶浓度对酶促反应速度的影响
在其它条件不变的情况下,若反应物浓度大大高于酶浓度时,则反应速度随酶浓度增加而增加,两者间成正比关系,即:V=k[E]
但若反应底物浓度较低,而且酶的浓度足够高时,增加酶浓度,反应速度基本不变。
(四)离子对酶活性的影响
就唾液淀粉酶而言,低浓度Cl一可以增加酶活性,高浓度的Cl一或者低浓度的Cu2+则会抑制酶的活性,而低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。不同的酶对不同的离子具有不同的效应。
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三、实验操作
(一)pH对酶活性的影响
取6只洁净的三角烧瓶,按表1编号和加试剂:
三角烧瓶编号
1
2
3
4
5
6
pH值
(m1)
(m1)
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取6支洁净试管,分别编号后,按表2操作:
表2pH对酶活性的影响
管号
1
2
3
4
5
6
pH值
缓冲液量(m1)
3
3
3
3
3
3
%淀粉(m1)
2
2
2
2
2
2
稀释100倍唾液(m1)
2
2
2
2
2
2
充分摇匀
37℃保温,lmin后,用滴管从3#管中吸l滴反应液,放白瓷板用碘液检验(1滴)。以后每隔1min检验一次。当3#管反应液遇碘液呈淡黄色时,立即向6支管中加碘液
碘液(滴)
2
2
2
2
2
2
充分摇匀
实验结果
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(二)温度对酶活性的影响
取3支洁净试管,按表3操作:
表3温度对酶活性的影响
管号
1
2
3
(m1)
2
2
2
%淀粉液(m1)
2
2
2
稀唾液1:50(m1)
1
1
1
立即处理温度
0℃
100℃
37℃
放置15min
分别从l、2、3支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果
改变处理温度至
37℃
37℃
37℃
作用时间
15min
再分别从1、2、3管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果
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(三)酶浓度对酶活性的影响
,编号,按表4加入淀粉液,缓冲液,加毕后放人37℃恒温水浴中保温5min。
表4酶浓度对酶活性的影响
管号
%淀粉液
稀释唾液
褪色时间
10
50
100
1
3ml
2ml
1ml
2
3ml
2ml
1ml
3
3ml
2ml
1ml
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,快速加不同浓度的稀释唾液,摇匀,立即放入37℃恒温水浴中。计时,并每隔1min从各管中取出1滴,用碘液检验,记录从加进酶液至碘液检验为橙黄色所需时间。
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(四)离子对酶活性的影响
取3支洁净试管,编号后按表5操作:
表5离子对酶活性的影响
管号
1
2
3
1%NaCl(m1)
1
%CuSO4(m1)
1
蒸馏水(m1)
1
%淀粉液(m1)
3
3
3
100倍稀释唾液(m1)
1
1
1
37℃恒温15min,然后冷却
碘液(滴)
2
2
2
结果
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