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抗体的制备与应用
抗血清的制备
单克隆抗体的制备
基因工程抗体
催化性抗体
单抗的医学应用
抗原抗体反应
抗原抗体反应原理
抗原抗体反应特点
常见免疫分析方法
沉淀反应
凝集反应
免疫标记技术
补体参与的抗原抗体反应
免疫分析灵敏度
本章小结
课后思考题
2011春夏
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抗原的准备
免疫动物
动物的选择
免疫途径
免疫剂量与周期
动物采血法
抗血清的纯化与保存
抗血清的鉴定
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抗血清与多克隆抗体
抗血清(antiserum):用抗原人工免疫实验动物,可获得含有特异性抗体的血清,称为抗血清。
多克隆抗体(polyclonalantibody):抗血清中抗体是多个抗原决定簇刺激不同B细胞产生的抗体,所以称为多克隆抗体。
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抗原的准备
半抗原与载体偶联制备完全抗原
常用的连接反应及双功能连接剂
佐剂的使用:佐剂与抗原按1:1比例混合乳化
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动物的选择
抗原与免疫动物的种属差异越远越好。
对蛋白质抗原,大部分动物皆适合常用的是山羊和家兔;甾体激素免疫多用家兔;酶类免疫多用豚鼠。
抗血清量的需要:大动物如马、骡等可获得大量血清(一头成年马反复采血可获得10000ml以上的抗血清);但有时抗体需要是不多,选用家兔或豚鼠即可。
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免疫途径
一般采用多点注射,一只动物注射总数约为8~10点,包括足掌及肘窝淋巴结周围,背部两侧、颌下、耳后等处皮内或皮下,免疫效果较好;亦有肌肉、腹腔、静脉注射途径。
腹腔、肌肉、皮内、皮下注射适合使用任何抗原,刺激局部淋巴结发生免疫应答;
静脉注射适合可溶性抗原及分散的单细胞悬液,不使用佐剂,免疫应答主要发生在脾脏。
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免疫剂量与周期
免疫剂量:
抗原用量视抗原种类及动物而异,一般大动物抗原剂量(以蛋白抗原为准)~1mg/只,~。
免疫周期:
初次免疫后,再经2~3次以上的加强免疫,一般3~4周间隔适合大部分动物,小动物10~14天,大动物2月左右。
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动物采血法
颈动脉放血法:这是最常用的方法,对家兔、山羊等动物皆可采用。
心脏采血法:此法多用于豚鼠、大鼠、鸡等小动物。此法采血技术应熟练,穿刺不准容易导致动物急性死亡。
静脉多次采血法:家兔可用耳中央静脉,山羊可用颈静脉。这种放血法可隔日一次,有时可采集多量血液。
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抗血清的纯化与保存
试血、采血:加强免疫后2-3次,可通过耳静脉或眼球采血,进行抗血清效价测定,当效价达到理想高度,可以心脏直接采血或动脉放血。待血凝后用针筒或吸管吸取血清。
抗血清纯化:盐析、层析(离子交换、分子筛、亲和层析)。
保存:低温冻存,冻干、加保护剂(叠氮化钠NaN3或BSA)4℃保存。
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抗血清的鉴定
效价鉴定:
效价又称滴度(titer),是表达抗血清中特异性抗体相对含量的一个半定量指标,即在一定条件下结合一定量抗原的抗血清的稀释度。
亲和力鉴定:
亲和力(affinity)指抗血清与相应抗原结合的强度,是描述抗体特异性的重要指标,常用亲和常数K表示。
抗体特异性鉴定:
常用琼脂双扩散法鉴定抗体特异性。
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