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一、实验目的:
;
、染色的基本技术,掌握细菌的
简单染色法及无菌操作技术;
。
二、实验原理:
1、染色原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性
染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷,能和
带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低,当它生
长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷,所以通
常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿
等)使其着色。酸性染料的离子带负电荷,能与带正电荷
的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时,细
菌所带正电荷增加,因此易被伊红、酸性复红或刚果红等
酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染
料,如伊红美蓝、伊红天青等。
简单染色法:是只用一种染料使细菌着色以
显示其形态的染色法,简单染
色不能辨别细菌细胞的构造。
2、显微镜油镜工作原理:
显微镜的分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与接物镜的数值口径成正比,与光波长度成反比,因此接物镜的数值口径愈大,光波波长愈短,则显微镜的分辨力愈大,被检物体的细微结构也愈能明显地区别出来。
能辨别两点之间最小距离=1/2光波长度÷数值口径
=1/2λ÷N·A
三、实验器材
1、活材料:
培养18-24h的金黄色葡萄球菌()
和枯草芽孢杆菌()。
2、染色液和试剂:
复红、美兰、二甲苯、香柏油。
3、器材:
载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。
四、实验步骤:
1、涂片:
取干净载玻片一块,在载玻片的左、右各加一滴蒸馏
水,按无菌操作法取菌涂片,左边涂金黄色葡萄球菌,右
边涂芽孢杆菌,做成薄的涂面,注意取菌不要太多。
整个过程中要注意无菌操作。(示范无菌操作技术)
2、干燥:让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文
火烘干。
3、固定:手执玻片一端,让菌膜朝上,通过火焰
2-3次固定(以不烫手为宜)。
4、染色:将固定过的涂片加复红或美兰染色1-2min。
5、水洗:用水洗去涂片上的染色液。
6、干燥:将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
7、镜检:先低倍观察,再高倍观察,并找出适当的视野
后,将高倍镜转出,在涂片上加香柏油一滴,将
油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。
8、绘图: