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免疫系统疾病的治疗和诊断的制作方法.docx

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免疫系统疾病的治疗和诊断的制作方法.docx

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专利名称:免疫系统疾病的治疗和诊断的制作方法
免疫系统疾病的治疗和诊断相关申请案本申请要求于2009年7月15日提交的美国临时申请号61/225,852的优先权。在先申请作为參考文献全文引入。
背景技术:
免疫系统保护人体不受病原体感染,细胞转化,以及物理/化学损伤。它的功能异常,无论是过度活化还是活化不足,都会导致不同的疾病。免疫系统功能异常可能由年龄老化、发育缺陷,疾病和医学治疗(例如化疗或免疫抑制)所导致。这需要治疗和诊断免疫系统疾病的药物和试剂。
发明内容
和方法。
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lstgprglcampqtgdaf(-151/同源异型域)Hom-I
核酸序列(SEQIDNO9)
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本发明涉及利用Hom-I或其抑制剂或其激活剂治疗和诊断免疫系统疾病的材料下面所示的是Hom-I的多肽和核酸序列Hom-I多肽(SEQIDNO1)cattttgaggtacctggaggcaaaqgttctaatacacatattttttttttaataacacaatcagcctcccatttttagtagtgatccgccgaccctaaaattaggaaggatagagctttcgttttccagttacaggtgtqaagcagaaaqtaggctgtgcagggaaagcacccaccctcctgactcaaggagcccctccccatacatgaacagacaatacaaacccacccaatttcacttttttaaacatgacagaagcccctagacaac
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(下划线编码区(ntl2to788,SEQIDNO:2)相应地,在ー个方面,本发明的特征在于ー种RNAi制剂,所述RNAi制剂含有第一链,所述第一链具有与编码
Hom-I蛋白的基因ー个区域同源的第一核酸序列。RNAi制剂靶向所述基因或其5’-非翻译区转录得到的mRNA。在一个实施方案中,第一序列包括UUCAGAAUCGCCGCAUGMACACAAACGG(SEQIDNO:6),UCUACUCMC⑶CUUCUGGCCUUGCCAAU(SEQIDNO:7),以及相应的DNA形式TTCAGAATCGCCGCATGAAACACAAACGG(SEQIDNO:4),TCTACTCAACGTCTTCTGGCCTTGCCAAT(SEQIDNO:8),RNAi制剂还可以包括第二链,所述第二链具有与第一序列互补的第二核酸序列。本发明的特征还在于ー种药物组合物,所述组合物包括刚刚提及的RNAi制剂。该組合物可以是ー种鼻腔喷雾剂或吸入組合物。上述制剂和组合物能够用于治疗患有免疫系统疾病或者处于免疫系统疾病风险中的患者的用途,例如炎症疾病,包括由病毒感染或化学试剂引起的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。特別地,可以向所需要的个体施用有效量的RAM制剂或组合物。在一个实施方案中,RNAi制剂具有SEQIDNO:6或7的核酸序列。所述个体可以是患有或疑似患有流行性感冒的个体,例如,SARS。在第二个方面,本发明的特征在于具有上述SEQIDN0:4,6,7,或8的分离的核酸序列或其互补序列。本发明的特征还在于具有下面列出的分离的核酸序列(SEQIDNO3)或其互补序列。5‘cgaatgcagaggctcctgcgatggccccggagtgagtcccccagaggagccggattagggctggaggcggccgagtcccccgagaggcccctcccgacattcccgc
ccccgcgcgccgctccccgggtcctccgcgtctctttcccgggaaagcctccctcggttcctgcgcggccgcacagcctggacgcagcgcacgcgggcaccggcctgactctcccaccccgaagcctgctcccaacctaagtccgccctgactctcccagcctgaagcctgctcgccctcgggtgtccgggctgggcacaggcgccagcgtccccctggagaggagaggtcgcccggcacctcccaggacaggcccaagtgggagtgggaccctccxaccttcctgcagcctcggcccgcggggxggggggxtgggagagatgaaaggaggtgaccgatcccgaaccatcgcctctccattaaccagggcccgcagccccgcccctcccccagacatcgaggagccggggaggtgtgaacggcctcctttgtgcctctgaatcgaaggcaattaggcgctgcttatctgggcattagccgtgtatgcaaaccgggctcccgccccctcctcctgggcttataaacgccgccgcctggcgaggcccgaggtggatcctgcgcctggccagccccgcctggccttccctccggcccacctggccgccじ‘在第三个方面,本发明的特征在于ー种降低个体炎症細胞(如巨噬細胞)水平或活性的方法。所述方法包括向需要的个体施用有效量的多肽的抑制剂,所述多肽包含序列SEQIDNO:1。在第四个方面,本发明的特征在于ー种通过向需要的个体施用有效量的多肽的抑制剂来降低个体体内前炎性細胞因子水平的方法,所述多肽包含序列
SEQIDNO:1。細胞因子的例子包括TNF-α,IL-Iβ,和IL6。在第五个方面,本发明的特征在于ー种治疗患有免疫系统疾病或者处于免疫系统疾病风险中的患者的方法。所述方法包括向需要的个体施用有效量的多肽的抑制剂,所述多肽包含序列SEQIDNO:1。免疫系统疾病可以是炎症或自身免疫性疾病,例如ARDS。在一个实施方案中,个体患有或者疑似患有流行性感冒。在上述的方法中,抑制剂的例子包括抗体(如导致细胞生长的抗体,包括anti-CD3),反义核酸,RNAi制剂,以及其他的大分子或小分子化合物和自然发生的化合物,它们都靶向于Hom-1。RNAi制剂可以具有核酸序列SEQIDN0:4,6,7,或8。小分子化合物的例子包括泼尼松,依木兰,甲氨喋呤,骁悉,和离子霉素。大分子的例子包括PHA。在一个实施方式中,每种方法进ー步包括在施用之前或之后,确定从该个体获得的样品中Hom-I的表达水平或活性,以确认Hom-I被抑制。在第六个方面,本发明的特征在于ー种提高个体体内炎症細胞(例如巨噬細胞)水平或活性的方法。该方法包括向需要的个体施用有效量的包含序列SEQIDN0:1或5的多肽,或其功能等同物,或编码多肽的核酸,或Hom-I的激活剂。激活剂的例子包括5-FU,D0X,放射,视黄酸,GM-CSF-IL4,白藜芦醇,鞣花酸,阿司匹林,水杨酸,大黄素和黄***类化合物以及能够诱导
Hom-I表达的这些物质的衍生物。在一个实施方案中,该方法进ー步包括在施用之前或之后,确定从该个体获得的样品中Hom-I的表达水平或活性,以确认Hom-I被催生。功能等同物是指与ー个常见多肽相似或者就是常见多肽衍生物的多肽,例如,具有ー个或多个点突变,插入,缺失,切断,融合蛋白或其組合的蛋白,大体上保留了常见多肽的能力,例如与LEF1/TCF的结合。在一个实施方式中,该多肽缺失ー个LEF1/TCF反式激活结构域。细胞增生症可以是ー个以LEF1/TCF介导的转录的异常激活为特征的病症。LEFl/TCF介导的转录的异常激活是指这样ー种细胞状态,即以下面的实施例描述的方法或其它类似的方法检测吋,LEF1/TCF介导的转录异常地高。SEQIDNO:5的功能等同物的例子包括非洲爪蟾(如Xom)、黒猩猩和猕猴的同源异型域。这些同源异型域序列列举在图1中。一般地,它们与SEQIDNO:5至少有30%(例如40,50,60,65,70,75,80,85,90,or95%)的同一性。例如,Hom-I的同源异型域与Xom的氨基酸序列有68%的同一性和85%阳性(类似)。在第七个方面,上述的核酸可以用于诊断免疫系统疾病的方法中,包括(1)細胞増殖性病症/癌症和(炎症或自身免疫疾病。細胞増殖性病症的例子包括急性淋巴細胞性白血病(ALL),慢性淋巴細胞白血病(CLL),和急性粒細胞白血病(AML)。炎性或自身免疫疾病的例子包括骨髄增生异常综合征(MDS),系统性红斑狼疮
(SLE),炎症性肠病(IBD),类风湿性关节炎(RA),和移植排斥反应。该方法包括从个体中获得生物样本;确定样本中編码含有SEQIDNO:1的多肽的基因表达水平。如果表达水平低于第一个预定的水平,或没有表达,则可确定个体患有或者易于患上細胞増殖性病症/癌症(ALL,CLL,和AML)。如果表达水平高于第二个预定的水平,则可确定个体患有或者易于患上炎症或自身免疫疾病。这样的预定水平能够从正常对照个体中获得。在第八个方面,本发明的特征在于控制患者治疗的方法。该方法包括确认患者处于或者需要ー个病症治疗,从该患者获取生物样本,确定样本中编码含有SEQIDN0:1的多肽的基因表达水平。如果表达水平达到或超过预定值,则可确定患者适合于治疗。相反,如果表达水平低于预定值,该患者则不应接受治疗。该方法可以进一歩包括将表达水平与患者或医生或患者的照看者进行沟通。在一个实施方式中,该病症是细胞増殖性病症,或免疫系统疾病,例如上面提到的ALL,CLL,AML,和MDS。对于ALL,CLL,AML,MDS,它们中Hom-I的表达水平是低于预定值的,Hom-I可以作为指导选择有效治疗策略的标志;对于移植患者,Hom-I可以用于确保免疫抑制剂的足量使用;对于自身免疫疾病,例如SLE,Hom-I可以用于监测免疫抑制剂的使用。举个例子,如果使用免疫抑制剂使Hom-I的表达水平降低到了所述的值,则表明需要停止使用免疫抑制剂以避免淋巴组织增生性疾病,如淋巴瘤。在第九个方面,本发明的特征在于用于诊断上面所述的病症或控制患者的治疗的试剂盒。该试剂盒包括ー个或多个选自于以下组的试剂,所述组包括具有序列
SEQIDNO1的多肽的特异性抗体,具有序列SEQIDNO1的多肽,扩增SEQIDNO:2或3片段的PCR引物对,以及在在严格的条件能与參考核酸的互补链杂交的核酸,所述參考核酸包含SEQIDNO:2,3,或5。严格杂交条件可由本领域技术人员适当地选择,例如,低严格条件可以被给定。低严格条件是,例如,42°C,2xSSC,,优选地,50°C,2xSSC,%SDS。高严格条件更优选和包括,例如,65°C,2xSSC,%SDS0然而,除了温度外,其它的多个因素,例如盐浓度也会影响杂交的严格性,本领域技术人员能够合适地选择这些因素来达到类似的严格性。本发明的ー个或多个具体实施方式
的详情列在附图和下面的描述中。根据描述、图片和权利要求,本发明的其它的特征,目的和优点将是显而易见的。
图IA和图IB是Xom与Hom-I同源异型区域的氨基酸序列比对(图1A)和Hom-I,预测的黒猩猩和猴的Hom-I的同源物的氨基酸序列比对,这表明Hom-I序列在灵长目动物中是保守的(图1B)。图2A和2B是Hom-I和它的缺失突变以及它们在体内与TCF4的相互作用的示意图,该相互作用通过免疫共沉淀western印记分析(图2A)利显示Hom-I与TCF4在HCTl16