免疫抑制性多肽与核酸的制作方法.docx

文档介绍：该【免疫抑制性多肽与核酸的制作方法 】是由【开心果】上传分享，文档一共【224】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【免疫抑制性多肽与核酸的制作方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。免疫抑制性多肽与核酸的制作方法
专利名称:免疫抑制性多肽与核酸的制作方法
技术领域:
本发明总体上涉及结合⑶80和/或⑶86的新颖多肽类,编码此类多肽的核酸,以及制备并使用此类多肽及核酸的方法。本发明的背景T细胞在免疫应答的起始及调控中发挥重要作用。为了产生T细胞的完全活化,要求至少两个不同的信号传导事件。一个第一信号是通过表达于T细胞表面上的T细胞受体与(TCR)与在表达于抗原呈递细胞(APC)上的主要组织相容性复合物(MHC)分子的环境中存在的特定抗原(Ag)之间的相互作用而产生。一个第二(共刺激)信号是由表达于APC上的共刺激性配体与它们的表达于T细胞上的对应受之体间的相互作用而产生。一种优势共刺激通路涉及在表达于APC上的⑶80(B7-)以及⑶86(B7-)配体与主要表达于T细胞上的⑶28以及CTLA-4(也称为⑶152)之间的相互作用。CTLA_4(细胞毒性T淋巴细胞抗原4)以及⑶28充当这些⑶80以及⑶86配体的受体。正向信号传导是通过⑶28受体介导的。这种或这些⑶80和/或⑶86配体与⑶28的结合通过促进免疫突触的形成而降低了T细胞活化的阈值(.,Science283:680-682(1999))。此外,CD28的共刺激活化或增强了对于T细胞的增殖以及存活具有重要性的因子的形成,如,白介素
_2(IL-2)、NF-kB,以及Bcl-XL(.,:1556_1561(1992);.,-4720(1997))。在体内,⑶28-缺陷的小鼠是严重免疫妥协的,并且显示了不良的抗原特异的T细胞应答(Green,.,Immunity1:501-508(1994))。当T细胞在这种共刺激性信号的缺失下被活化时,可造成T细胞的无反应性或耐受。负向信号传导是通过CTLA-4受体介导的。这些⑶80以及⑶86配体各自以高亲和力结合到CTLA-4上,并且衍生自⑶28信号传导的平衡免疫增生性反应。CTLA-4信号传导的潜在机制包括竞争性结合共刺激性分子CD80/CD86(Masteller,.,:5319(2000))、通过将磷酸酶诱导至免疫突触上而抑制TCR信号传导(.,Science282:2263(1998))、以及破坏这种免疫突触(Pentcheva-.,Immunity21401(2004);.,:129(2003);.,Science3131972(2006))在体内,CTLA-4缺陷的小鼠显示了深度的自身免疫表型,其特征为大量的组织浸润以及器官破坏(.,Science270985(1995))。设计成拮抗这种⑶80/⑶86共刺激通路的治疗剂(如,可溶性人类CTLA-4-Ig)具有用于治疗自身免疫疾病以及紊乱的可能。本发明提供了具有改进的能力以调整或阻抑经
由这种⑶80/⑶86共刺激通路的信号传导的的有利分子,以及将此类分子用于所选择且不同的T细胞应答的操纵的方法。此类分子在如以下详细讨论的不同应用中具有有益的用途。本发明的概述在第一个方面,本发明提供了一种分离或重组的CTLA-4多肽,该多肽包括一个多肽序列,该多肽序列与在SEQIDNO:159中所示的人类CTLA-4细胞外结构域的多肽序列具有达到15个氨基酸残基差异,其中该分离或重组的CTLA-4多肽具有结合⑶80或⑶86或二者之一的一个细胞外结构域的能力,和/或具有阻抑或抑制一种免疫应答的能力。根据本发明第一方面的一种多肽可与SEQIDNO36的多肽序列具有至少90%的序列一致性,或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。根据本发明第一方面的一种多肽可包括SEQIDNO:36的多肽序列。根据本发明第一方面的一种多肽可与SEQIDNO50的多肽序列具有至少90%的序列一致性,或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列一致性。根据本发明第一方面的一种多肽可包括SEQIDN050的多肽序列。根据本发明第一方面的一种多肽可具有结合人类⑶80或人类⑶86或二者之一的一个细胞外结构域的能力。根据本发明第一方面的一种多肽可包括长度为124个氨基酸残基的一个多肽序列。根据本发明第一方面的一种多肽可包括一个氨基酸取代,该取代在选自下组的一个氨基酸位置上,该组的构成为对应于相对
SEQIDNO:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的多个氨基酸位置根据本发明第一方面的一种多肽可包括二、三、或四个氨基酸取代,这些取代在选自下组的多个氨基酸位置上,该组的构成为对应于相对SEQIDN0159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的氨基酸位置。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置70上的一个氨基酸取代,如取代S70F。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置104上的一个氨基酸取代,如取代L104E。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置30上的氨基酸取代,如取代T30N/D/A或取代T30N。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置64上的一个氨基酸取代,如取代S64P。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置50上的一个氨基酸取代,如取代A50M。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置54上的一个氨基酸取代,如取代M54K/V或取代M54K。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置65上的一个氨基酸取代,如取代I65S。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置56上的一个氨基酸取代,如取代N56D。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置55上的一个氨基酸取代,如取代G55E。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对
SEQIDNO159的位置85上的一个氨基酸取代,如取代M85A。本发明第一方面的一种多肽可包括在相对SEQIDNO159的位置24上的一个氨基酸取代,如取代A24E/S或取代A24E。本发明第一方面的一种多肽可具有对于CD86或它的一根细胞外结构域的一种结合亲和力,该结合亲和力是大约等于或大于一种单体人类CTLA-4细胞外结构域对于CD86或CD86细胞外结构域的结合亲和力。本发明第一方面的一种多肽可具有对于CD80或它的一个细胞外结构域的一种结合亲和力,该结合亲和力大于一种单体人类CTLA-4细胞外结构域对于CD80或CD80细胞外结构域的结合亲和力。本发明第一方面的一种多肽可具有阻抑一种免疫应答的能力。本发明第一方面的一种多肽可具有抑制T细胞活化或T细胞增殖的能力。在第二方面中,本发明提供了一种分离或重组的多肽多聚体,该多肽多聚体包括本发明第一方面的至少两个多肽。在第三方面中,本发明提供了一种分离或重组的融合蛋白,该融合蛋白包括(a)根据本发明第一方面的一种多肽,以及(b)—种第二多肽,其中该第二多肽是一种IgFc多肽,并且其中该融合蛋白具有结合CD80和/或CD86、或二者之一的或两者的一个细胞外结构域的能力,和/或调整或调节一种免疫应答的能力。在第四方面中,本发明提供了一种分离或重组的二聚体融合蛋白,该二聚体融合蛋白包括根据本发明第三方面的两个单体融合蛋白。在第五方面中,本发明提供了一种分离或重组的核酸,该核酸包括一个核苷酸序
列,该核苷酸序列编码了本发明第一方面的一种多肽、本发明第二方面的一种多聚体、本发明第三方面的一种融合蛋白、或本发明第四方面的一种二聚体融合蛋白。在第六方面中,本发明提供了一种载体,该载体包括本发明第五方面的一种核酸。在第七方面中,本发明提供了一种分离或重组的宿主细胞,该宿主细胞包括本发明第一方面的一种多肽、本发明第二方面的一种多聚体、本发明第三方面的一种融合蛋白、本发明第四方面的一种二聚体融合蛋白、本发明第五方面的一种核酸、和/或本发明第六方面的一种载体。在第八方面中,本发明提供了一种药物组合物,该药物组合物包括一种药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的载体、或药学上可接受的稀释剂,以及以下的一项或多项本发明第一方面的一种多肽、本发明第二方面的一种多聚体、本发明第三方面的一种融合蛋白、本发明第四方面的一种二聚体融合蛋白、本发明第五方面的一种核酸、本发明第六方面的一种载体、和/或本发明第七方面的一种宿主细胞。在第九方面中,本发明提供了阻抑一种免疫应答的方法,所述方法包括将一种B7-阳性细胞与一个有效量的以下的至少一项进行接触本发明第一方面的一种多肽、本发明第二方面的一种多聚体、本发明第三方面的一种融合蛋白、本发明第四方面的一种二聚体融合蛋白、本发明第五方面的一种核酸、本发明第六方面的一种载体、和
/或本发明第七方面的一种宿主细胞,以阻抑一种免疫应答,其中一种免疫应答由此受到阻抑。在第十方面中,本发明提供了本发明第一方面的一种多肽、本发明第二方面的一种多聚体、本发明第三方面的一种融合蛋白、本发明第四方面的一种二聚体融合蛋白、本发明第五方面的一种核酸、本发明第六方面的一种载体、和/或本发明第七方面的一种宿主细胞,用于阻抑一种免疫应答。在第十一方面中,本发明提供了本发明第一方面的一种多肽、本发明第二方面的一种多聚体、本发明第三方面的一种融合蛋白、本发明第四方面的一种二聚体融合蛋白、本发明第五方面的一种核酸、本发明第六方面的一种载体、和/或本发明第七方面的一种宿主细胞,在制造用于阻抑一种免疫应答的一种药物的用途。在第十二方面中,本发明提供了一种偶联物,该偶联物包括本发明第一方面的一种多肽、本发明第二方面的一种多聚体、本发明第三方面的一种融合蛋白、或本发明第四方面的一种二聚体融合蛋白,以及共价连附于这种多肽、多聚体、融合蛋白、或二聚体融合蛋白上的一个非多肽部分,其中所述偶联物具有阻抑一种免疫应答的能力。本发明的其他方面如以下说明。在另一个方面,本发明提供了一种分离或重组的多肽,该多肽包括一个多肽序列,该多肽序列具有与选自下组的至少一种多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或
100%的序列一致性,该组的构成为SEQIDN0S:1至73,其中该多肽结合⑶80或⑶86或二者之一的一个细胞外结构域(ECD),和/或具有阻抑或抑制一种免疫应答的能力。在另一个方面,本发明提供了一种分离或重组的多肽,该多肽包括一个多肽序列,该多肽序列具有与选自下组的至少一种多肽序列至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%的序列一致性,该组的构成为SEQIDN0S1至73,其中该多肽具有对于一个人类CD86细胞外结构域或人类CD80细胞外结构域的一种结合亲和力,该结合亲和力对应地是大约等于或大于一个人类CTLA-4细胞外结构域对于该人类CD86细胞外结构域或人类CD80细胞外结构域的结合亲和力,并且其中该多肽可任选地具有阻抑一种免疫应答的能力。一些此类多肽具有对于该人类CD86细胞外结构域的一种结合亲和力,该结合亲和力大于该人类CTLA-4细胞外结构域对于该人类CD86细胞外结构域的结合亲和力。一些此类多肽具有对于该人类CD80细胞外结构域的一种结合亲和力,该结合亲和力大于该人类CTLA-4细胞外结构域对于该人类CD80细胞外结构域的结合亲和力。在另一个方面,本发明提供了一种分离或重组的突变CTLA-4多肽,该多肽包括一个多肽序列,该多肽序列(a)与在SEQIDNO:159中所示的人类CTLA-4细胞外结构域的多肽序列具有不超过10、9、8、7、或6个氨基酸残基(例如,不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10
个氨基酸残基)的差异,并且(b)包括至少一个氨基酸取代,该取代在对应于相对SEQIDNO:159的位置50、54、55、56、64、65、70、或85的一个氨基酸位置上,其中该突变CTLA-4多肽具有结合CD80或CD86或二者之一的一个细胞外结构域的能力,和/或具有阻抑或抑制一种免疫应答的能力。在另一个方面,本发明提供了一种分离或重组的多肽,该多肽包括一个多肽序列,该多肽包括⑴与SEQIDNOS:1至73所构成的组中选出的一个多肽序列至少95%的序列一致性,以及(ii)一个苯丙***酸残基,该苯丙***酸残基在对应于由SEQIDNOS1至73所构成的组中选出的所述多肽序列的位置70的氨基酸位置上,其中该多肽具有结合CD80和/或CD86、或二者之一的或两者的一个细胞外结构域的能力,和/或具有阻抑或抑制一种免疫应答的能力。在另一个方面,本发明提供了一种分离或重组的突变CTLA-4多肽,该突变CTLA-4多肽结合CD80和/或CD86、和/或二者之一的或两者的一个细胞外结构域,和/或可阻抑一种免疫应答,其中所述多肽包括一个多肽序列,该多肽序列(a)与在SEQIDN0:159中所示的人类CTLA-4细胞外结构域多肽的多肽序列具有不超过10、9、8、7、或6个氨基酸残基(例如,不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸残基)的差异,并且(b)包括至少一个氨基酸取代,其中所述至少一个氨基酸取代包括S70F,其中根据SEQIDN0:159对多个氨基酸残基位置进行编号。在另一个方面,本发明提供了一种分离或重组的突变
CTLA-4多肽,该突变CTLA-4多肽包括一个多肽序列,该多肽序列(a)与在SEQIDNO159中所示的人类CTLA-4细胞外结构域的多肽序列具有不超过11、10、9、8、7、或6个氨基酸残基(例如,不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、或11个氨基酸残基)的差异,并且(b)包括至少一个氨基酸取代,该取代在对应于相对SEQIDNO159的位置24、30、32、50、54、55、56、64、65、70、或85的一个氨基酸残基位置上,其中该突变CTLA-4多肽具有结合⑶80或⑶86或二者之一的一个细胞外结构域的能力,和/或具有阻抑或抑制一种免疫应答的能力。在另一个方面,本发明提供了一种分离或重组的多肽,该多肽包括一个多肽序列,该多肽序列(a)与在SEQIDN0:31所示的多肽序列具有不超过10、9、8、7、或6个氨基酸残基(例如,不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸残基)的差异,并且(b)包括以下的至少一项在对应于SEQIDNO:31的位置50的一个位置上的一个甲硫氨酸残基、在对应于SEQIDNO31的位置54的一个位置上的一个赖氨酸残基、在对应于SEQIDNO31的位置55的一个位置上的一个谷氨酸残基、在对应于SEQIDNO31的位置64的一个位置上的一个脯氨酸残基、在对应于SEQIDNO31的位置65的一个位置上的一个丝氨酸残基、在对应于SEQIDNO31的位置70的一个位置上的一个苯丙氨酸残基,其中根据