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促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法
本发明公开了一种促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法,其特点是:包括预处理、加热变性、冷却破碎、加热杀酶、粗过滤并醇沉、真空浓缩、静置沉淀、过滤、冷冻干燥工艺步骤;制取的海参活性肽不仅对机体具有良好的免疫调节作用,而且具有非常显著的伤口愈合促进作用,可促进伤口提前4-5天愈合,并且愈合后的伤口平整,不易留下疤痕。
【专利说明】促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法
[0001]【技术领域】:
本发明涉及伤口愈合【技术领域】,具体地讲是一种促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法。
[0002]背景技术:
在实际生活中,有些病人,比如糖尿病患者等接手外科手术后,伤口愈合非常慢,这不仅给病人带来很多痛苦,而且由于愈合慢,感染的几率大大增加,因此,如何采取措施,促进术后伤口尽快愈合,是外科医学中的一个重要课题。
[0003]术后伤口愈合是指机体手术后伤口部位的皮肤等组织出现离断或缺损后的愈复过程,为包括各种组织的再生和肉芽组织增生、瘢痕组织形成的复杂组合,表现出各种过程的协同作用。损伤的程度及组织的再生能力决定修复的方式、愈合的时间及瘢痕的大不。因此,治疗原则应是缩小创面
(如对合伤口)、防止再损伤和促进组织再生。虽然组织的再生能力是在进化过程中获得的,但仍受全身及局部条件的影响。因此,应当避免一些不利因素,创造有利条件促进组织再生修复。
[0004]目前,医学界广泛应用的伤口愈合促进措施,主要是外敷措施,即在伤口外,敷药物防止感染、同时促进伤口愈合,通过内服来促进伤口愈合的产品,几乎没有,这方面的研究也非常少见。
[0005]众所周知,海参活体受伤后,自身具有极强的修复和再生能力。调查研究发现,生长自北大西洋海域水下30英尺左右海中的冰岛野生海参,其生活的地理位置靠近北极圈,海水温度常年保持在4°C以下,冬季表面结冰,终年人迹罕至。加之冰川雪山覆盖土地,周围无任何工业及人类活动的污染。生活在冰冷水域中的冰岛野生海参,生长缓慢,成品参都是具有10年以上参龄的野生海参,是名副其实的老海参。它含有丰富的蛋白质,矿物质及多种海参活性成份,胆固醇含量几乎为零。冰岛野生海参冰岛野生海参含有丰富优质的高蛋白质,%,胆固醇含量非常低,,低脂肪含量也非常低,%,酸性粘多糖适中,营养保健价值比较好,是海参中的极品。
[0006]
【发明内容】
:
本发明的目的是克服上述已有技术的不足,而提供一种促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法;主要解决现有的促进术后伤口愈合只能外敷而无内服产品的问题。
[0007]本发明的技术方案是:促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法,其特殊之处在于,包括如下步骤:
a预处理,选用新鲜海参为原料,剖开、除去内脏后,得到鲜参体;b加热变性,鲜参体加入纯净水,加热煮沸,并保持沸腾5-10分钟,使蛋白适度变性;c冷却破碎、加热杀酶,冷却至室温后,将参体破碎成小块,并重新加热至40_50°C,至温后,加入中性蛋白酶,温度40-70°C,酶解时间8-12h,然后加热煮沸杀酶;
d粗过滤并醇沉,杀酶后,冷却至室温,用30-50目的丝絹进行粗过滤,加95%(V/V)酒精,使体系中酒精含量达到50-70%(V/V),静置5-10小时,用100目的滤布过滤,分离沉淀,收集滤液;所得沉淀用于后续提取海参多糖;
e真空浓缩,真空浓缩所得滤液,浓缩条件为:温度30-50°C,绝对压力1000-5000Pa,当体积达到绿叶体积的1/10左右,即可;
f静置沉淀,浓缩液中加入浓度为18-20%的单宁溶液,加入量为浓缩液体积的2-5%,静置沉淀3-5小时,100目滤布过滤,除去沉淀,收集滤液;
g过滤,滤液中加入粉末状活性炭,加入量为滤液体积的1-3%(w/V),将体系加热到50-80°C,维持1-2小时;用100目滤布过滤,并收集滤液,将滤液真空浓缩至原体积的1/3-1/5;
h冷冻干燥,浓缩液真空冷冻干燥,得淡黄色粉末,即为分子量不超过2500的海参肽产
品O
[0008]进一步的,c步骤所述的中性蛋白酶的加入量为1000_5000U/kg鲜参体。
[0009]进一步的,h步骤所述的真空冷冻干燥条件为:绝对压力50_100Pa,温度20-30°C,时间8-12h。
[0010]本发明所述的促进术后伤口愈合的海参肽的制备方法与已有技术相比具有突出的实质性特点和显著进步,以新鲜海参为原料,生物酶解制取的分子量低于2500的海参活性肽,不仅对机体具有良好的免疫调节作用,而且具有非常显著的伤口愈合促进作用,研究发现,这种活性肽能够促进术后小鼠伤口周围毛细血管的形成,与对照组小数相比,可促进伤口提前4-5天愈合(对照组小鼠一般需要13天左右,而实验组织需要8-9天即可),并且愈合后的伤口平整,不易留下疤痕。
[0011]【具体实施方式】:
为了更好地理解与实施,下面结合实施例详细说明本发明;所举实施例仅用于解释本发明,并非用于限制本发明的范围。
[0012]实施例1,选用新鲜冰岛野生海参IOOkg为原料,剖开、除去肠子等内脏后,;然后加入IOOkg纯净水,加热煮沸,并保持沸腾8分钟,使蛋白适度变性;冷却至室温后,将参体破碎成小块,并重新加热至45°C,以利于酶解,至温后,加入中性蛋白酶,加入酶量按3000U/kg鲜参体,酶解条件为:温度55°C,酶解时间8-12h,至时,加热煮沸杀酶;杀酶后,冷却至室温,并用40目的丝絹进行粗过滤,除去大颗粒的杂质后,加95%(V/V)酒精,是体系中酒精含量达到60%(V/V),静置8小时,用100目的滤布过滤,分离沉淀,收集滤液;所得沉淀用于后续提取海参多糖;真空浓缩滤液所得滤液,浓缩条件为:温度40°C,绝对压力3000Pa,当体积达到绿叶体积的1/10左右,即可;浓缩液中加入浓度为19%的单宁溶液,%,静置沉淀4小时,100目滤布过滤,除去沉淀,收集滤液;滤液中加入3%的粉末状活性炭,加入量为滤液体积的2%(w/V);将体系加热到65°C左右,;用100目滤布过滤,并收集滤液。将滤液真空浓缩至原体积的1/4,即可;浓缩液真空冷冻干燥,条件为:绝对压力75Pa,温度25°C,时间IOh;所得淡黄色粉末,即为分子量不超过
2500的海参肽产品,该产品分子量不超过2500的海参肽含量不低于80%。
[0013]将上述实施例1的海参肽进行如下实验:
1、实验动物:
昆明种小白鼠,体重18-22g,由中国预防医学院购得。
[0014]2、试剂:***AR天津市津东天正精细化学试剂厂
无水乙醇AR莱阳市康德化工有限公司
甲醛AR江苏双源化工厂
二甲苯AR莱阳市康德化工有限公司
1%盐酸酒精,1:1甘油蛋白,苏木精溶液,%伊红溶液,石蜡,生理盐水。
[0015]3、仪器:电子水平AEV-210湘仪天平仪器厂
显微镜E-200江南光电集团新飞达光学仪器公司
数码相机S-4500丽达数码技术有限公司
恒温干燥箱YB-1江苏东台电器厂
电热恒温水浴锅龙口市先科仪器公司
切片机,坩埚,烧杯,三角瓶,广口瓶,包埋盒,酒精灯,镊子,剪刀,手术刀片。
[0016]4、实验方法:
:
250ml三角瓶中放入少量脱脂棉,倒入IOml***,左手带胶皮手套用无名指与小指将小鼠尾根部夹住,中指、食指与大拇指将小鼠颈部皮肤连同两只耳朵一起抓起,然后将小鼠头部塞进三角瓶,伸进约3cm,头部周围不能贴在三角瓶壁上,秒表计时,测最佳苏醒时间。
[0017]:
用手术刀片在小鼠背部划一长形伤口,深达皮下肌肉。
[0018]
,印在小鼠背部进行定位,用无菌镊子从圆圈中心将小鼠皮肤夹起,然后用无菌剪刀沿印迹剪除背部皮肤,便能得到大小、深浅基本一致的圆形伤口。
[0019]:
取20只体重为20±2克的小白鼠,随机分为2组,。,即对照组;,即海参实验组。
[0020]:
:
每隔一天用三角尺测量伤口大小,并观察伤口变化情况。
[0021]:
光镜下主要观察毛细血管生长分布情况和肉芽组织生长情况。
[0022]小白鼠在术后1、3、5、7、11、13天分6次,每次各组取I只作拉颈处死,然后用镊子夹起圆形伤口外围皮肤,用剪刀剪下放在涂有1:1甘油蛋白胶的载玻片上(里面朝上),直接放显微镜下观察,数码相机摄影。
[0023]5、结果与讨论:
***对小白鼠的麻醉效果:
【权利要求】
,其特征在于,包括如下步骤:a预处理:选用新鲜海参为原料,剖开、除去内脏后,得到鲜参体;b加热变性:鲜参体加入纯净水,加热煮沸,并保持沸腾5-10分钟,使蛋白变性;c冷却破碎、加热杀酶:冷却至室温后,将参体破碎成小块,并重新加热至40-50°C,至温后,加入中性蛋白酶,温度40-70°C,酶解时间8-12h,然后加热煮沸杀酶;d粗过滤并醇沉:杀酶后,冷却至室温,用30-50目的丝絹进行粗过滤,加95%(V/V)酒精,使体系中酒精含量达到50-70%(V/V),静置5-10小时,用100目的滤布过滤,分离沉淀,收集滤液;所得沉淀用于后续提取海参多糖;e真空浓缩:真空浓缩所得滤液,浓缩条件为:温度30-50°C,绝对压力1000-5000Pa,当体积达到滤液体积的1/10,即可;f静置沉淀:浓缩液中加入浓度为18-20%的单宁溶液,加入量为浓缩液体积的2-5%
,静置沉淀3-5小时,100目滤布过滤,除去沉淀,收集滤液;g过滤:滤液中加入粉末状活性炭,加入量为滤液体积的1-3%(w/V),将体系加热到50-80°C,维持1-2小时;用100目滤布过滤,并收集滤液,将滤液真空浓缩至原体积的1/3-1/5;h冷冻干燥:浓缩液真空冷冻干燥,得淡黄色粉末,即为分子量不超过2500的海参肽产品O
,其特征在于,c步骤所述的中性蛋白酶的加入量为1000-5000U/kg鲜参体。
,其特征在于,h步骤所述的真空冷冻干燥条件为:绝对压力50-100Pa,温度20-30°C,时间8_12h。