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从酶组合物中除去亚硫酸氢盐副产物的方法
本发明提供的是从包含亚硫酸氢盐物质和酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法。该方法包括将组合物与包含至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物,由此可从所述组合物中分离该醛-亚硫酸氢盐复合物。
【专利说明】从酶组合物中除去亚硫酸氢盐副产物的方法
[0001](国际申请号为PCT/US2006/031926)、申请日为2006年8月16日、发明名称为“从酶组合物中除去亚硫酸氢盐副产物的方法”的发明专利申请的分案申请。
【背景技术】
[0002]在起治疗剂作用的口服制剂中可包括不同类型的酶。例如,包括水解口服多聚糖或抑制细菌生长的酶。更具体地说,例如,已报道为了除去血小板沉淀,在口服制剂中可采用诸如变聚糖酶(mutanase)、葡聚糖酶、木瓜蛋白酶和1,3_葡聚糖等酶。
[0003]通常,由其性质而言,酶对环境诸如pH、温度及离子浓度的改变是敏感的,因此通常有必要采取措施保护酶以维持所述酶的预期口腔护理功效。为了改善酶的性能,已建议使用酶稳定剂,诸如螯合剂和抗氧化剂。这样酶稳定剂的实例是EDTA、葡萄糖酸钠、亚硫酸氢钠、金属没食子酸盐、锡酸钠和抗坏血酸。
[0004]然而,在酶稳定剂中,亚硫酸氢盐物质(bisulfitematerials),即含有亚硫酸氢盐离子的化合物,显示对一些个体有毒,和/或往往改变口腔护理制剂的感官性质。因此,在所述组合物进一步加工和提供给消费者之前,希望能除去或降低酶组合物中的亚硫酸氢盐物质。虽然亚硫酸氢盐物质可通过常规技术诸如碱性提取和氧化剂中和除去,但这些技术往往对口腔组合物中酶的催化活性产生不利影响。因此,希望引入对治疗组合物中酶活性没有负面影响的的除去亚硫酸氢盐物质的替代性方法。迄今为止,一直没有可在中性非氧化条件下实施的从酶组合物中除去亚硫酸氢盐物质的常规方法。
【发明内容】
[0005]根据本发明,提供一种从包含亚硫酸氢盐物质和一种或多种酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法。所述方法包括将组合物与包含至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物;由此可从所述组合物中分离所述醛-亚硫酸氢盐复合物。
[0006]在一个实施方式中,所述方法包括将组合物与包含至少一个醛官能团诸如醛糖的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物,然后从组合物中分离该醛-亚硫酸氢盐复合物,其中所述酶选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶乳糖过氧化物酶、乳铁传递蛋白、溶菌酶、脂肪分解酶、碱性蛋白酶
(alcalase)、糖酶(acarbohydrase)、葡萄糖淀粉酶(glucoamylasae)、葡聚糖酶、变位酶(mutase)、丹宁分解酶(tannase)和脂肪酶。
[0007]在另一个实施方式中,提供一种从包含亚硫酸氢盐物质和酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法,其中所述方法包括将组合物与具有至少一个醛官能团的基质接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物,然后从所述组合物中分离结合了基质的亚硫酸氢盐。
[0008]在又一个实施方式中,进一步提供一种基本上不含亚硫酸氢盐物质的酶组合物。所述酶组合物通过将组合物与含有至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物然后从所述组合物中分离所述醛-亚硫酸氢盐复合物获得。【具体实施方式】
[0009]本发明涉及一种从包含一种或多种酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法。更具体而言,发明涉及一种通过将酶组合物与含有至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物然后从所述组合物中分离所述亚硫酸氢盐复合物的方法。本发明也涉及一种不含亚硫酸氢盐的酶组合物,所述组合物通过将酶组合物与含有至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物然后从所述组合物分离所述亚硫酸氢盐复合物而制备。
[0010]本发明提供一种从酶组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法,所述方法通过使用具有至少一个与亚硫酸氢盐物质形成复合物的醛官能团的化合物,然后从所述组合物中分离所述醛-亚硫酸氢盐复合物。优选为,所述方法在基本中性非氧化条件下进行,从而获得基本上不含亚硫酸氢盐的包含基本上未降解的酶的组合物。
[0011]本文使用的术语“降解”表示相对于未提取亚硫酸氢盐物质的酶组合物而言酶活性的降低。根据本发明,在亚硫酸氢盐接触醛的步骤以及其后分离亚硫酸氢盐-醛复合物的步骤之后,或在这两个步骤之后,优选保持酶活性的50%以上,80%以上或90%以上。
[0012]术语“亚硫酸氢盐物质”表示包含化学键合的亚硫酸氢根离子或者包含亚硫酸氢根离子作为化学复合物组分的化合物,诸如亚硫酸氢钠或其他亚硫酸氢盐。
[0013]为了从酶组合物中除去亚硫酸氢盐,本发明使用包含至少一个醛官能团的化合物。“醛”定义为一类具有R-CHO结构的羰基化合物,其中R基可以是芳香基团或者脂肪族基团。为了获得基本上不含亚硫酸氢盐的包含基本上未降解酶的组合物,可希望选择在中性非氧化条件下能与亚硫酸氢盐物质形成复合物的醛。本发明的醛可以是具有低分子量例如小于约1000道尔顿的单官能醛。所述醛可以是醛糖。
[0014]通过从所述组合物分离亚硫酸氢盐-醛复合物获得基本上不含亚硫酸氢盐的组合物。这样的分离可通过本领域已知的任何分离方法诸如化学或者物理方法、或者化学及物理方法的结合完成。适合于本发明的分离方法的实例包括但不限于过滤、差异扩散、柱分离和珠子分离和通过局部化或鳌合分离`。
[0015]另外,所述分离可通过将所述组合物与结合有醛的物体或物品相接触,形成复合物,并除去结合有醛-亚硫酸氢盐复合物的物体或物品实现。作为另外一种选择,为了获得具有基本上未降解酶的组合物,希望在整个亚硫酸氢盐物质与酶组合物接触以及其后分离亚硫酸氢盐-醛复合物的步骤中都基本维持中性非氧化条件。例如,酶溶液的pH可保持在约5到约8的范围内,并且保持离子浓度。
[0016]本发明的除去亚硫酸氢盐的方法可适用于包含任何类型酶的组合物。有利的是,本发明可用于处理最终接触人或动物皮肤或者粘膜的酶组合物。例如,酶组合物可以是任何一种能包含在口腔护理或者个人护理产品中的酶组合物。这种酶的实例包括但不限于糖酶诸如葡糖淀粉酶;从天然果品中提取的酶诸如蛋白酶,糖酶诸如α-淀粉酶、β-淀粉酶和丹宁分解酶,和脂肪酶诸如植物脂肪酶、胃脂肪酶和胰脂肪酶。优选为,经本发明处理的组合物中的酶可由植物来源获得。在本发明的实践中可用的酶可以选自由α和淀粉酶、葡聚糖酶、变聚糖酶
(mutanase)、天然酶诸如木瓜蛋白酶(来自木瓜)和菠萝蛋白酶(来自菠萝)、丝氨酸蛋白酶诸如胰凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、碱性蛋白酶(alcalase)、溶菌酶、果胶酶和葡聚糖酶组成的组。
[0017]根据本发明的实施方式,提供一种利用包含至少一个醛官能团的基质以实现方便地除去亚硫酸氢盐-醛复合物的方法。所述采用包含至少一个醛官能团的基质的方法可与不采用基质除去亚硫酸氢盐的方法在相同的条件下实施。具有醛官能团的基质可以是常规的基质,例如选自多孔和无孔珠子(porousandnon-porousbeads)、薄膜、微粒和颗粒(specks,andparticles)组成的组。在另一实施方式中,包含至少一个醒官能团的基质可分散在载体上以助于分离亚硫酸氢盐-醛复合物。本领域已知的任何类型的载体都可用于本发明。载体的实例包括但不限于柱、容器、过滤器、海绵和凝胶。
[0018]在又一实施方式中,提供一种基本上不含亚硫酸氢盐物质的酶组合物,该酶组合物根据本发明的除去亚硫酸氢盐物质的方法制备,其中通过与包含至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物并从所述组合物中分离该醛-亚硫酸氢盐复合物以制得所述酶组合物。因为本发明的酶组合物是在中性非氧化条件下制备的,所以组合物中酶的活性基本上没有降解。优选为,酶活性的约90%保持未降解。由本发明方法生产的酶组合物基本上不含亚硫酸氢盐物质,因此可以有利地用于口腔护理或个人护理产品,诸如洁齿剂、皮肤护理产品及头发和指甲护理产品。
[0019]虽然提及的具体实例已经对本发明进行了描述,但对本领域技术人员来说显而易见的各种修改都属于本发明的范围。
【权利要求】
,所述方法包括:(a)将组合物与包含至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物,其中所述包含至少一个醛官能团的化合物为具有低于1000道尔顿的低分子量的单官能醒;和(b)从组合物中分离所述醛-亚硫酸氢盐复合物;其中所述单官能醛为醛糖。
,其中所述分离选自过滤、差异扩散、柱分离和珠子分离。
,其中所述包含至少一个醛官能团的化合物在5到8的pH范围内与所述组合物混合。
,其中在形成醛-亚硫酸氢盐复合物的步骤之后所述酶基本上不降解。
,其中在分离醛-亚硫酸氢盐复合物的步骤之后所述酶基本上不降解。
,其中所述酶来自植物来源。
,其中所述酶选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶乳糖过氧化物酶、乳铁传递蛋白、溶菌酶、脂肪分解酶、碱性蛋白酶、糖酶、葡萄糖淀粉酶、葡聚糖酶、变位酶、丹宁分解酶和脂肪酶。
,其中在分离步骤后酶活性的90%以上未降解。
,所述方法包括:(a)将组合物与具有至少一种单官能醛的基质接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物,其中所述具有至少一种单官能醛的基质具有低于1000道尔顿的低分子量;和(b)从所述组合物分离基质结合的亚硫酸氢盐;其中所述醛为醛糖。
,其中所述基质选自多孔和无孔珠子、薄膜、微粒和颗粒。
,其中所述基质分散在载体上。
,其中所述载体选自柱、容器、过滤器、海绵和凝胶。