文档介绍：小鼠B细胞激活因子受体(BAFFR)-ELISA试剂盒说明书
小鼠B细胞激活因子受体(BAFFR)酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书
产品编号:E-EL-M0174
(本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!)
声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组BAFFR浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及
时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠BAFFR抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的BAFFR会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠BAFFR抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠BAFFR抗体与结合在包被抗体上的小鼠BAFFR结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值,BAFFR浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中BAFFR的浓度。
标本收集:
1. 血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内***试管。
2. 血浆:,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂标本。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (, pH=)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测
(具体处理方法可参考:?tid=477 )
6. 标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。
7. 标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃/-80℃冰箱内,避免反复冻融,1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。
8. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释
(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。
试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器,EP管及一次性吸头:-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水
4. 吸水纸
检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。
3. 标准品: 加入标准品&样品稀释液10分钟,待其充分溶解后,
轻轻混匀(浓度为200pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓度: 200、100、50、25、、、、0 pg/mL ,样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制100pg/mL标准品: 200pg/,混匀即可,其余浓度依此类推。
4. 生物素化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配
制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制
100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物当日使用。
标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)
200
100 50 2