文档介绍：微生物菌种保藏方法
菌种是一种重要的生物资源,菌种保藏是重要的微生物基础工作。菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变,以便于研究与应用。
(一)常规保藏方法
1 目的
了解菌种保藏的基本原理
掌握几种常用的菌种保藏方法。
2 原理
菌种保藏的方法很多。其原理却大同小异,不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。使微生物的代谢活动处于最低的状态,但又不至于死亡,从而达到保藏的目的。依据不同的菌种或不同的需求,应该选用不同的保藏方法。一般情况下,斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用,也比较容易制作。
3 材料
待保藏的适龄菌株斜面
肉汤蛋白胨斜面,半固体及液体培养基。
试剂
10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。
器具
用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。 4 流程
斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏 5 步骤
标记试管→接种→培养→保藏
取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。
将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。
置37恒温箱中培养48小时。
斜面长好后,直接放入4℃的冰箱中保藏。这种方法一船可保藏三个
月至半年。
标记试管→穿刺接种→培养→保藏
步骤
取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支,贴上标签,注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。
用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种,朝直立柱中央直刺至试管底部,然后又沿原线拉出。
置37恒温箱中培养48小时。
半固体直立柱长好以后,放入4℃的冰箱中保藏。这种方法一般可保藏半年至一年。
标记试管→接种→培养→加石蜡油→保藏
步骤
无菌操作下将5毫升石蜡油到培养好的菌种上面,加入的量以超过斜面或直立柱1厘米高为宜。
:石蜡油封存以后,同样放入4℃冰箱中保存。也可直接放在低温干燥处保藏。这种方法保藏期一般为一至二年。
流程
制沙土管→灭菌→制菌液→加样→干燥→保藏
步骤
选取过40目筛的黄砂,酸洗,再水洗至中性,烘干备用;过120目筛子的黄土备用;按1份土加4份砂的比例均匀混合后,装入小试管,装量1厘米左右。
加压蒸汽灭菌,直至检测无菌为止。
取3毫升无菌水至待保藏的菌种斜面中,用接种环轻轻刮下菌苔。震荡制成菌悬液。
,再用接种环拌匀。
把装好菌液的砂土管放入干燥器或同时用真空泵连续抽气,使之干燥。
干燥后的砂土管可直接放入冰箱中保藏;也可以用石蜡封住棉花塞后放冰箱中保藏。
(二)冷冻干燥保藏法
1目的
。
2 原理
冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。利用有利于菌种保藏的—切因素,使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下,因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。
3 材料
菌株
待保藏的各种菌种。
2% HCl;牛奶。
安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花器。
4 流程
备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→活化
5步骤
安瓿管先用2%HCl浸泡,再水洗多次,烘干。将标签放入安培管内,管口塞上棉花,灭菌备用。