文档介绍：心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)ELISA试剂盒说明书
心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)酶联免疫分析试剂盒预期应用
ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)含量。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗 h-FABP抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 h-FABP抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 h-FABP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度( OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板:一块(96孔)
2. 标准品(冻干品): 2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为150 ng/ml,请先稀释至30 ng/ml,再做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成30 ng/ml,15 ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml, ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。如配制15 ng/ml标准品: ( ) 30 ng/,混匀即可,其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液:1×20ml。
4. 检测稀释液A:1×10ml。
5. 检测稀释液B:1×10ml。
6. 检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制 -。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11. 覆膜:5张
12. 使用说明书:1份
自备物品
1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热)
2. 微量加液器及吸头,EP管
3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸
标本的采集及保存
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即
可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心
15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃
保存,但应避免反复冻融。
注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影