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机理:G+、G-主要由其CW化学成分得差异而引起对乙醇得通透性,
抗脱色能力得差异。主要有肽聚糖得厚度与结构所决定。
G+得CW:肽聚糖层厚,脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水,孔径减少,
透性降低,不易脱色,呈初染得蓝紫色。
G-得CW:肽聚糖层薄,脂质含量高。乙醇脱色时,类脂被乙醇溶解,透性
升高,细胞被复染显红色。
步骤:①涂片:在干净得载玻片上滴一滴水,用接种环挑取菌体均匀涂
布于水中。
②固定:将玻片靠近酒精灯火焰,蒸干水分,但不要烤焦。
③初染:用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。
④媒染:以碘液媒染1min,水洗,吸干水分。(细胞内形成结晶紫
与碘得复合物,增强相互作用)
⑤脱色(关键步骤):以95%得乙醇脱色30s,应适当振荡均匀,就
是乙醇脱色完全。
⑥水洗,吸干。
⑦复染:??(第2张)复染30s,水洗吸干。
⑧干燥镜检。
2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。
芽孢得耐热性在于芽孢衣对多价阳离子与水分得透性很差,以及
皮层得离子强度很高,这就使皮层产生了极高得渗透压去夺取芽孢核
心中水分,其结果造成皮层得充分膨胀与核心得高度失水,正就是这种:.
失水得核心才赋予芽孢极强得耐热性。
3、引起微生物培养过程中PH变化得几种可能反应,并说明如何能够
维持微培PH稳定。
答:培养过程中,由于营养物质被分解利用,代谢产物得形成与积累,会
导致PH变化。
(第2张中得图)
还与培养基得C/N比有关,C/N高,经培养基后PH显著下降,C/N低,经
培养基后PH明显上升。
PH调节:①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐,KHPO呈碱
24
性KHPO酸性,只在一定得PH范围内调节(6、4--7、2)
,24
②大量产酸得菌株,加CaCO调节,CaCO难溶于水,不会使培养液得
33
PH过度增加,但可不断中与微生物产得酸。
③培养液中存在天然得缓冲系统,如AA,肽,Pr均属***电解质,也起缓
冲得作用。
④过酸:治标------加NaOH、NaCO中与,治本-----加适量氮源:NaNO3、
23
Pr、NH3·H2O;增加通风量。
⑤过碱:治标-----H2SO4、HCl中与,治本----加适量碳源:G类,脂类;减
小通风量。
3、抗生素法与菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株?
抗生素法(青霉素法):适用于细菌。原理:青霉素抑制肽聚糖链间得交
联,组织了合成完整得CW,野生型B处于正常生长繁殖,所以对青霉素
敏感,可被抑制或杀死;营缺B在基本培养基上休眠状态存活下来,从:.
而达到浓缩营缺型目得。制霉菌素法适用于真菌,其可与cm上?(第1
张)醇作用,引起cm损伤,因为它只能杀死生长繁殖着得真菌,所
以、、、、、、
菌丝过滤法:基本培上,野生型霉菌,?菌得孢子能萌发并长成菌丝,而
缺型孢子一般不萌发,或不能长成菌丝,因此培养一段时间后,用灭菌
脱脂棉或滤纸滤去菌丝,收集滤液,重复数遍后可除去大部分野生型,
从而……
4、生产蛋白酶得枯草芽孢杆菌发生遗传变异,使得产量性状下降,您如
何解决?写出具体实验方案。
答:将一定量得枯草芽孢杆菌培养液,做一定浓度得稀释,涂布在含有
酪素蛋白质得基本培养基上,37°C培养一段时间后,取出培养基,观察
单菌落形成得透明圈大小,取透明圈直径与菌落直径之比较大得菌落,
挑取培养做进一步得鉴定,即可得到高产蛋白酶得枯草芽孢杆菌。
5、以磺***为例,说明化学治疗机得作用机制。
答:机理:磺***就是叶酸组成部分对氨基苯甲酸得结构类似物,(磺***类
药物取代对氨基苯甲酸,干扰叶酸得合成,抑制了转***反应,导致代
谢紊乱,从而抑制B生长),磺***得抑菌作用就是因为许多细菌需要自
己合成叶酸而生长,磺***对人体细胞无毒性,因为人体缺乏从对氨基苯
甲酸合成叶酸得相关酶-----二氢叶酸合成酶,不能用外界提供得对氨
基苯甲酸自行合成叶酸,而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。
(磺***类----与正常代谢产物竞争酶得活性中心,干扰了酶得功能,从而
干扰代谢得正常进行)。:.
6、画出生长曲线。(第1张)
1、微生物得共性?哪个最基本?
答:①体积小,面积大(最基本)②吸收多,转化快③生长旺,繁殖快思适
应性强,易变异⑤分布广,种类多。
2、比较G+,G-B在CW结构,组成,对溶菌酶,青霉素得敏感性4方面
得异同点。
结构成分对溶菌酶青霉素
G+单层,组分肽聚糖(90%)磷壁敏感生长期得
简单,厚酸(10%)G+对其敏感
G-多层,组分内壁层:肽聚糖外敏感不敏感
复杂,薄膜:脂多糖,磷脂,脂
蛋白
3、表型延迟现象?如何克服?
答:表型延迟:表型得改变落后于?(第四张)改变得现象,分为
①分离性延迟;突变得?经DNA复制与细胞分裂后变成纯合状态,表
型才能表现出来。②生理性延迟;杂合状态→纯合状态,仍不能表现出
来,(如营缺型)通过中间培养(CM,培养过夜),可使突变?稳定下来,克
服表型延迟。
4、培养B常用得斜面培养基就是什么?简述配制程序。
答:牛肉膏蛋白胨培养基
①称量;按配方依次准确称量②融化:取少量水于烧杯中,加1%得蛋白
胨,加热溶解,加0、5%得牛肉膏,加热溶解,加0、5%得NaCl,热熔,加水:.
补充到所需体积。③调PH至7、6左右。④加琼脂固体2%,热熔。
⑤分装入试管,加塞,包扎,高压灭菌⑥搁置斜面(斜面长度不超过试管
一半)⑦无菌检查:将灭菌得培养基放入37°C得温室中培养24-28h,
以检查灭菌就是否彻底。
5、啤酒酵母在分批发酵中得生长曲线分哪几个时期?在菌种扩培时,
哪个时期做种子?为什么?
答:延滞期,对数生长期,稳定期,衰退期。对数期做种子。利于缩短延滞
期。
6、菌种衰退得根本原因?防治措施?
答:?得自发突变。
措施:①减少传代次数②创造良好得培养条件③采用不易衰退得菌种
传代④采取良好得菌种保藏措施
4、菌种衰退得根本原因,防止措施。如何区分衰退与饰变?
答:根本原因:?得自发突变。(②传代次数得影响,就是负突变株比例占
优势,③培养条件)
防止措施见上题。
区分:衰退:指随着菌体得不断生长,负突变菌株得数量占整个菌体数
量得比例增大,最终导致菌株得生产性能大幅下降得现象。
①原有形态性状不典型,②生长速率下降③代谢产物生产力下降④对
宿主侵袭力下降⑤抵抗力下降
饰变:遗传物质结构不发生变化,而只在转录与转译水平上得表型变化,
可以同一条件继续培养,观察子代得情况。:.
饰变特点:暂时性,不可遗传性,表现为全部个体得行为。变异:遗传性,
群体中极少数个体得行为。
5、gone?突变得特点?
答:①自发性②非对应性③稀有性(突变率10-6~10-9)④独立性⑤可诱
发性(升高10~10^5倍)⑥稳定性⑦可逆性(原养型<=>突变型)
6、v(第三张)得特点。
答:①形体微小,能通过细胞滤器(0、22um),电子显微镜下才能瞧见②
不具有细胞机构,主要成分NA,Pr③V只含有一种核酸,DNA或RNA
④无核糖体,即无产能酶系,也无Pr,NA合成酶系,专性活细胞内寄生⑤
无个体生长,也不进行二分裂,以NA,Pr等“元件”装配,实现大量繁殖。
⑥离体下以无生命得生物大分子状态存在⑦对大多数抗生素不敏感,
对干扰素敏感。
7、?月元病毒得致病机理。
答:月元病毒就是一种Pr侵染颗粒,仅有Pr组成,称作PrP。
细胞型PrP----PrP^c对蛋白酶敏感,无凝聚能力,而致病型PrP---PrP^sc
对蛋白酶有一定抗性,可凝集成纤维状组织,PrP^sc进入细胞后,与
PrP^c结合,形成PrP^sc---PrP^c复合体,PrP^c构型发生改变,转化成
PrP^sc,PrP^sc数量呈指数增加,其潜伏期长,对中枢神经损害严重。
估菌计数法及其特点(笔记P31)
乳糖操纵子(P30)
1、
营养价值融化温度(℃)凝固温度(℃)常用C(%):.
琼脂无96401、5~2、0
明胶氮源35205~12
2、伴孢晶体?它在何种B中产生?
答:伴孢晶体:苏云金芽孢杆菌等少数芽孢杆菌在其形成芽孢得同时,
会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形得碱溶性蛋白晶体(δ肉***)称
为伴孢晶体。
对约200种昆虫无为鳞翅目幼虫有毒杀作用,可制成B杀虫剂。
3、霉菌菌落得特征?
答:①质地疏松,呈絮状,网状,绒毛状,地毯状。②形态大,分为局限性生
长(青、曲)与蔓延性生长(根毛)③菌落干燥(孢子)
④颜色丰富,正反颜色常不一致,中心与边缘常不一致。⑤各种霉菌,在
一定培养基上,形成得菌落大小,形状,颜色相对稳定,为分类依据之一。
4、利用磷酸盐或碳酸钙如何维持PH稳定性?
答:①磷酸氢二钾略呈碱性,磷酸氢二钾略呈酸性,两物质以等摩尔浓
度溶液PH为6、8,其缓冲能力一般在6、4~7、2范围内有效。
磷酸氢二钾+H阳离子---->磷酸氢二钾+K阳离子
磷酸二氢钾+K阳离子+OH-→磷酸氢二钾+H2O
②大量产酸得菌株,加入碳酸钙调节,碳酸钙难溶于水,不会使培养基
PH过度升高,但可不断中与微生物产得酸,同时放出二氧化碳,而降培
养基PH控制在一定范围。
5、单倍体酵母细胞经??(第5张)诱变后,得到一系列得突变株,欲从中
分离筛选出一株(Leu-),请设计合理得试验程序。:.
答:淘汰型野生型→(制霉菌素法)→检出→鉴定(滤纸片法)
将单倍体酵母细胞突变株,制成菌悬液,均匀涂布于完全培养基上,长
成单个菌落之后,以逐个检出得方式接种于完全培养基上,并影印到基
本培养基上,在适宜条件下培养一段时间,在完全培养基上生长,而在
基本培养基上不生长得,即为营养缺陷型菌株。将此菌株检出离心,水
洗之后制成适当浓度得菌悬液,与基本培养基均匀混合后,倾注于平板
中,干燥凝固之后,在板上划分几个区,在区中加入蘸有色AA得滤纸片,
经培养后,在纸片周围有浑浊得生长圈得,说明为色AA营养缺陷株。
6、MR,V、P、实验得原理。
答:MR:用来检测由G产生得有机酸,如甲酸,乙酸,乳酸等,细菌代谢糖
产酸,PH降低,***红指示剂由橙色(PH=6、3)变成红色(PH=4、2)
大肠杆菌---阳性:利用乳糖产生乳酸,培养后PH<4、5
大肠杆菌---阴性:早起产有机酸,后转化有机酸→乙醇,***酸。
②V、P、用来测定细菌利用G产生非酸性或中性末端产物得能力,
如***酸。***酸经缩合→乙酰***甲醇(经碱性、氧化)→二乙酰。
二乙酰与蛋白胨中精AA中胍基作用,生成红色化合物,产气肠杆菌---
阳性,大肠杆菌---阴性。
7、什么叫生长曲线?单细胞微生物得典型生长曲线分几期?划分依
据?
答:生长曲线:将少量纯种单细胞微生物接种到定量得液体培养基中,
定时取样测定细胞数量,以培养时间为横坐标,以菌数得对数为纵坐标
作图,得到一条反应在整个培养期间菌数变化规律得曲线。:.
分为延滞期,对数期,稳定期,衰亡期。
根据生长速率常数划分,即单位时间内分裂次数得不同。
8、为什么诱变时,要制成充分分散得单细胞或单孢子悬液?对放线
菌进行诱变育种时,宜处理其孢子还就是菌丝细胞?为什么?
答:使每个细胞均匀接触诱变剂,减少表型延迟现象,并避免长出不纯
菌落。多使用单核无性孢子,由于孢子生理上处于休眠状态,单核区
基中了大部分得DNA,减少分离表型延迟,提高突变效果。
培养基原则:①目得明确②适宜得营养物质③浓度及配比合适④控制
PH条件⑤控制氧化还原电位⑥原料来源经济节约⑦灭菌处理
1、青霉素得作用机制?
答:原理:β-内酰***环得结构与肽聚糖单体五肽尾末端得D-Ala-D-Ala
二肽结构相近,因而可竞争性得抑制转肽酶得活性,抑制单体间交联,
形成缺损得CW。青霉素对生长旺盛得G+有明显得抑制作用,对休眠
期得无抑制,对G+得作用比G-强得多。
2、筛选抗代谢结构类似物突变株得意义就是什么?
答:在含有较高浓度终代谢结构类似物得培养基中,野生型细胞不能生
长,而遗传性得解除了反馈抑制或反馈阻遇得抗代谢结构类似物突变
株则能生长,突变株在终产物累积得情况下仍然可以不断合成这一产
物,所以采取一定得方法,筛选到抗代谢结构类似物突变株,即可获得
终产物得高产菌株。
3、酿酒酵母生活史。(同P15)
4、烈性噬菌体?生活史包括几个过程?:.
答:感染宿主细胞后能在细胞内正常复制并引起宿主细胞迅速裂解得
噬菌体。
吸附→侵入→增殖(NA复制,Pr得生物合成)→装配(成熟)→裂解(释
放)
5、缩短延滞期得措施
答:①利用遗传学方法改变种得遗传特性,使延滞期缩短,②利用对数
生长期得细胞做种子,③尽量使接种前后使用得培养基组成不要相差
太大④适当扩大接种量
6、计算代时(G),繁殖代数(n),生长速率常数(R)
答:见第七张
7、诱变育种?举例①非电离辐射诱变剂②电离辐射诱变剂③烷化剂
④插入诱变剂⑤间接引起碱基置换得诱变剂
答:诱变育种:指利用物理或化学诱变剂处理微生物群体细胞,促进其
突变率显著提高,然后从中选取少数符合育种目得得突变株得方法。
①紫外线②x射线,γ射线③EMS,NTG④吖啶类颜料,ICR类⑤碱基类
似物(5-BU等)
(直接引起:①亚***G:C<--->A:T,②羟***:只引起G:C<--->A:T③烷化
剂G:C<--->A:T)
8、什么就是鉴别培养基?利用EMB培养正常大肠杆菌与沙门氏菌
时,菌落现象?为什么?
答;鉴别培养基:用于鉴别不同类型微生物得培养基,在培养集中加入
能与目得菌得无色代谢产物发生颜色反应得指示剂,从而用肉眼就能:.
将该种微生物得菌落与外形相似得其她微生物菌落相区分得培养基。
伊红与美蓝在低酸度时结合形成沉淀,起产酸指示剂作用,大肠杆菌强
烈分解乳糖而产生大量混合酸,菌落被染成深紫色,还可瞧到绿色金属
闪光。沙门氏菌不能利用乳糖,菌落无色通明。
1、微生物得产能方式有?与食品发酵工业密切相关得微生物得代谢
方式有哪几种?
答:微生物产能方式分为:发酵,有氧呼吸,无氧呼吸。
与食品发酵工业密切相关得发酵,实质就是底物水平磷酸化,,底物氧
化不彻底,产能水平低,为厌氧条件,兼性厌氧菌在有氧得条件下,从发
酵→呼吸作用,对发酵作用抑制(巴氏效应)
2、高压蒸汽灭菌法得操作步骤与注意事项?
答:步骤:①取出内层锅,外层锅加水至与三角搁架相平②放回内层锅,
放入带灭菌物品,加盖并将盖上排气软管插入内层锅③打开加热开关,
并同时打开排气阀3-5Min④关上排气阀,温度升至121℃计时,控制热
源119-123℃15-20min⑤关上开关,断电后压力降0开盖取物⑥无菌
检查
注意;①切勿忘记加水,水量不可过少②三角瓶,试管口不要与桶壁接
触③切勿忘记打开排气阀排锅内空气④压力降为0才能打开排气阀,
开盖
3、培养基应包括哪几种营养物质?如何控制PH?
答;碳源,氮源,能源,生长因子,无机盐,水
治标过酸----NaOH、NH3·H2O,过碱----H2SO4、HCl:.
治本酸---加氮源,增大通风量,碱----加碱?(第8张)源,减小通风量
加缓冲剂:加碳酸钙
4、如何延长对数生长期?
答;补充营养物质,调整PH,取走代谢产物,改善物化条件,调整营养配
比,C/N比4/1时,菌体大量繁殖。
5、简述烈性噬菌体一步生长曲线制作过程,并绘制曲线图。
答:适量噬菌体接种于培养好得高浓度敏感细胞中,②经数min吸附后,
将培养物高倍稀释,或加入抗V抗血清,中与给定时间内未吸附得噬菌
体,从而使因吸附噬菌体建立同步感染③适温下继续培养,定时取样,
测样品中V得效价。感染T横坐标,V效价纵坐标,绘制定量描述烈性
噬菌体生长规律得试验曲线。(曲线见第9张)
6、利用物理化学诱变剂对微生物进行诱变得目得有哪些?中间培养
得目得?用简图表示利用EMS对微生物进行诱变育种得过程?
答:诱变育种目得:①获得高产菌株②抗性突变种③营养缺陷型突变株
(检致癌物,高产次代产物)
中间培养为了克服表型延迟现象。
EMS(***磺酸乙酯)----烷化剂----直接引起碱基置换
(烷化后得碱基引起碱基配对错误,也能使嘌呤整体直接从DNA链上
脱下来,产生一个缺口,在与缺口相对应得位点上,就能配上任何碱基,
从而引起转换或颠换)
选择出发菌株→前培养,制作菌悬液→EMS合适剂量诱变处理→中间
培养→初筛培养基涂布→划线分离→菌种鉴定:.
7、简图表示两亲株细胞(A+B-、A-B+)进行原生质体融合得操作示意
图,并对主要步骤作简要说明。
答:见第9张
常用培养基:细菌---牛肉膏蛋白胨培养基(PH7-7、5)
放线菌---高氏1号培养基(PH7-7、5)
酵母菌---麦芽汁培养基(PH4、5-5,5)
霉菌---查氏合成培养基(PH4、5-5,5)
1、放线菌得培养:28℃,3-5d,PH=7~7、5染色:碳酸复红染1min
观察:(链霉菌)菌落干燥紧密,正反颜色不一致,边缘有辐射状皱褶,小
不蔓延,不易挑起。
2、酵母菌培养:25~28℃,24h,PH=4、5~5、5,染色:美蓝--活体染色
观察:(酿酒酵母)菌落较B得大且厚,多为乳白色,表面湿润,粘稠,边缘
整齐,易被挑起。
3、霉菌培养:28℃,5~7天,PH=4、5~5、5,染色:乳酸碳酸棉签染液。观
察:见第10张
4、酵母菌①大小测定:测微尺,酵母培养物制成水漫片,高倍镜测出宽
长与目镜测微尺得格数,再乘以目镜微尺每格代表长度。
②计数:血球计数板:死菌+活菌总数,1ml总菌数=5中方格总数/5*中方
格数*10^4*稀释倍数
平板菌落计数法:只活菌
5、革兰氏染色:机理+步骤(04真题①)
6、MR,V、P、试验(02真题⑥):.
吲哚试验---检验水解色AA,水解色AA(经水解)→***酸+吲哚
大肠杆菌---阳性,产气肠杆菌---阴性
柠檬酸盐试验----检测柠檬酸盐就是否被利用
大肠杆菌---阴性(绿色),产气肠杆菌---阳性(蓝色)
硫化氢试验---就是否分解含硫有机物
大肠杆菌----阴性,产气肠杆菌----阳性(黑色沉淀)
1、大肠杆菌Escherichiacoli食品卫生重要指示菌,合成V大肠菌素
B,
2、枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis淀粉酶,蛋白酶
3、苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensisδ-肉***,生物农药
4、酿酒酵母(真)Sacharomycescerevisiae酒类酿造
5、灰色链霉菌(放)Streptomycesgriseus链霉素
6、产黄青霉Penicillumchrysogenum青霉素
7、米曲霉Aspergillusoryzae酱,酱油
8、黑曲霉A、niger淀粉酶,柠檬酸
9、黄曲霉A、flavus蛋白酶
10、米根霉Rhizopusoryzae制曲酿酒,乳酸
11、总状毛霉Mucorracemosus腐乳,豆豉(强蛋白质分解能力)
属名:首字母大写,斜体种名:小写