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主要内容:
一、基础知识
二、实验操作
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一、基础知识---蛋白质分离和提取的原理
㈠凝胶色谱法(分配色谱法)
1、凝胶:
一些微小多孔的球体(内含许多贯穿的通道,由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖)
2、概念:
根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法
3、原理:
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4、具体过程
一、基础知识---蛋白质分离和提取的原理
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分子量
大
小
直径大小
大于凝胶颗粒空隙直径,被阻挡在颗粒的外面
小于凝胶颗粒空隙直径,可以进入颗粒内部
运动方式
垂直向下移动
垂直向下移动,无规则扩散进入颗粒内部
运动速度
较快
较慢
运动路径
较短
较长
洗脱次序
先从凝胶柱洗脱出来
后从凝胶柱洗脱出来
一、基础知识---蛋白质分离和提取的原理
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用凝胶色谱法分离蛋白质时,分子量大的蛋白质
,,移动速度较快
,,移动速度较快
D
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相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个
B
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1、概念:在一定的范围内,能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用,具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。
㈡缓冲溶液:
2、作用:
能够抵制()对溶液()的影响,维持PH基本不变。
外界的酸或碱
pH值
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3、缓冲溶液的配制
通常由()种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的()就可以制得()使用的缓冲液。
1-2
使用比例
在不同PH范围内
思考:说出人体血液中缓冲液。
NaH2PO4/Na2HPO4H2CO3/NaHCO3
磷酸缓冲液,保证血红蛋白的正常结构和功能,便于观察(红色)和科学研究其(活性)
4、在本课题中使用的缓冲液?
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(三)电泳:
:
带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
:
①许多重要的生物大分子,如多肽、
核酸等都具有可解离的基团,在一定的PH下,这些基团会带上正电或负电。②在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小,形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。
:
琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰***凝胶电泳。
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