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优选艾滋病实验室检查
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实验室检查
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免疫学检测
AIDS患者
正常(×109/L)
CD4
<
1(~)
CD4/CD8
<1
~
淋巴细胞总数
<1
2~3
流式细胞仪测定
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血清学检测(1)
HIV抗体的初筛试验——ELISA(酶联免疫试验)
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血清学检测(2)
HIV抗体的确证试验——Westernblot(免疫印迹试验)
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血清学检测(3)
HIV抗原检测——ELISA夹心法
测定p24抗原
敏感性很高(7~10pg/ml)
特异性稍差(可有假阳性)
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分子生物学检测(1)
HIVRNA检测—RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)
PCR:高温变性(94℃)→低温退火(55℃)→适温延伸(72℃);经25~30个循环,成倍数扩增
荧光定量PCR:比常规PCR多一个寡聚核苷酸探针(带一个荧光发光分子和一个荧光淬灭分子)
应用:PCR查PBMCs前病毒DNA;RT-PCR查血浆中的病毒RNA
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分子生物学检测(2)
淋巴细胞HIVRNA检测——
Northern印迹杂交(Northernblot)
原理:RN***段经电泳分离,从凝胶中转移到***纤维素滤膜,再用探针杂交
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分子生物学检测(3)
HIV变异株检测——Sanger测序法
原理:核酸扩增时,核苷酸在某一固定点开始,随机在某一特定的碱基处终止,产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸,通过在尿素变性的PAGE胶上电泳,获得DNA序列
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