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文档介绍：毕业设计实验
提取条件探讨及高效液相色谱法分离与测定技术研究
一、实验目的
1、掌握柴胡中柴胡皂苷a提取条件探讨的方法。
2、熟悉了解高效液相色谱法分离与测定柴胡中柴胡皂苷a的操作。
二、
三、实验原理(略) 实验材料与仪器
试剂:乙腈(色谱纯),甲醇(色谱纯),重蒸馏水,柴胡皂苷a对照品(纯度>98%),柴胡粗粉(样品),70%乙醇,1%Na2CO3
仪器:高效液相色谱仪,二极管阵列检测器,,785A紫外可见光光度计,AS2060超声清洗器,微孔溶剂过滤器。
四、实验步骤
(一)柴胡中柴胡皂苷a提取条件探讨
1、色谱条件色谱柱,Diamond C18柱(5μm,×250mm)流动相: 乙腈:水:甲醇=40:45:15,流速1ml/min,检测波长210nm。
2、标准曲线准确称取柴胡皂苷a标准品约5mg。分别置于10ml容量瓶中,用甲醇溶解后稀释至刻度。混匀后分别进样2μl、5μl、10μl、15μl、20μl,按上述色谱条件作HPLC分析。以对照品含量对峰面积积分值作图,得一条直线。得回归方程,看线性关系。
3、提取溶剂的考察
称取柴胡粗粉3份(每份20g),分别以水、70%乙醇(1% Na2CO3)回流提取2次,,滤过,合并滤液。取上述滤液各10ml,60—70℃水浴挥干溶剂,残渣加甲醇溶解并定容至5ml。,作供试品溶液,测定柴胡皂苷a,计算提取率。
4、粉碎与否的考察
称取柴胡饮片和粗粉各20g,加入70%乙醇(1%Na2CO3)回流提取2次,,滤过,合并滤液。取滤液各10ml,60—70℃水浴挥干溶剂,残渣加甲醇溶解并定容到5ml。,作供试品溶液,测定柴胡皂苷a,计算提取率。
5、提取时间的考察
称取柴胡粗粉4份(每份20g),加70%乙醇(1%Na2CO3)分别提取2小时、3小时、4小时、6小时。滤过,合并滤液。取上述滤液各10ml,60—70℃水浴挥干溶剂,残渣加甲醇溶解并定容到5ml。,作供试品溶液,测定柴胡皂苷a,计算提取率。
(二)高效液相色谱法分离与测定柴胡中柴胡皂苷a
1、色谱条件:Supelco-C18(5μm,150mm×),,流动相:V():V(H2O)=90:10,检测波长:208nm,进样量:10μl。
2、称取柴胡皂苷a标准品5mg,用乙腈溶解,定容至10ml,冷藏保存,使用时稀释成适当浓度,。
,用含5%吡啶的甲醇溶液浸渍24h,然后在50℃、功率为2000kw条件下超声波处理20min,对样品进行提取,然后用乙腈定容至
5ml,冷藏保存,。
按照上述色谱条