文档介绍：水杨酸测还原糖
3,5-二硝基水杨酸法
目的要求:
掌握还原糖和总糖的测定原理,学****用比色法测定还原糖的方法。
实验原理:
在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。
试剂和器材
一、试剂
3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂: DNS溶于少量热蒸馏水中,溶解后移入1000ml容量瓶中,加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml,再加入45g丙三醇,摇匀,冷却后定容至1000ml。
500ml DNS试剂:先准备好水浴锅,把水温定在45度左右,称好酒石酸钾钠,在水浴中溶于250ml蒸馏水中,再加入称好的3,5-二硝基水杨酸,再加入131ml 2M氢氧化钠,再依次加入苯酚,亚硫酸钠,冷却后定容至500ml.
,溶于500mL蒸馏水中,加热(不超过50℃),于热溶液中依次加入3,5-,NaOH ,,,搅拌至溶解完全,冷却后用蒸馏水定容至
1000mL,贮存于棕色瓶中,室温保存。
,溶于50ml蒸馏水中,加热,于热溶液中依次加入3,5-,,,搅拌至溶,冷却后用蒸馏水定容至100ml,贮于棕色瓶中,室温保存
葡萄糖标准溶液:准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100ml,。
6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%)用蒸馏水稀释到500ml。碘-碘化钾溶液:称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH:称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
% 酚酞指示剂。
二、材料
藕粉,玉米淀粉。
三、器材
WFJ UV-2000型分光光度计,水浴锅,电炉,15mm×180mm试管。
操作方法
一、葡萄糖标准曲线制作
取5支15mm×180mm试管,。
管号
葡萄糖标准液/ml
蒸馏水/ml 1 0
葡萄糖含量/mg 0 2
OD540
0 0
1 2 3 4 5
1
,于沸水浴中加热2min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,,摇匀,在540nm波长处测定光吸收值。。以葡萄糖含量(mg)为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。
二、样品中还原糖的提取
准确称取 ,放在100ml烧杯中,先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状,然后加入40ml蒸馏水,混匀,于50℃恒温水浴中保温20min,不时搅拌,使还原糖浸出混。过滤,将滤液全部收集在50ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,即为还原糖提取液。