文档介绍：液相色谱法
颜丽
-固吸附柱色谱法
经典的液-固吸附柱色谱法是以吸附剂为固定相,有机溶剂为流动相利用不同组分在吸附剂上吸附性能的差异,进行分离分析的方法。它用与分离分析极性至弱极性的化合物,不适用于分离分析强极性的物质。
-液分配柱色谱法
经典的液-液分配色谱法是将某种溶剂(固定液)涂布在多孔微粒的表面或纤维上,形成一层薄膜而构成固定相,利用。试样中各组分在互不相溶的两相中分配系数的差异而实现分离。几乎各种类型的化合物皆可用分配色谱法进行分离分析。尤其适用于亲水性物质及既能溶于水又稍能溶于有机溶剂的物质如极性较大的生物碱、苷类、有机酸、酸性成分、糖类及氨基酸的衍生物等。
离子交换色谱法是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同的电荷的溶质离子进行可逆交换。依据不同的离子对交换剂具有不同的亲和力而实现分离。离子交换色谱
法主要适用于分离离子或可离解的化合物【3】。
分子排阻色谱法是根据溶质分子大小的不同即分子筛效应而进行分离的。分子排阻色谱法的固定相是有一定孔径的多空性填料,流动相是可
以溶解样品的溶剂。相对分子质量小的化合物可以进入孔中,滞留时间长;相对分子质量大的化合物不能进入孔中,直接随流动相流出。它利用分子筛对相对分子质量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。常用于分离高分子化合物,如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。
薄层色谱法的分离原理与柱色谱法相同,按分离机理分为吸附、分配、离子交换和空间排阻等;按薄层板的分离效率不同分为经典薄层色谱法和高效薄层色谱法。
纸色谱法是以滤纸作为载体,以构成滤纸的纤维素所结合水分为固定液,以有机溶剂为展开剂的色谱分析方法。构成滤纸的纤维分子中有许多羟基,被滤纸吸附的水分子中约有6%与纤维素上羟基以氢键结合成复合态,这一部分水是纸色谱的固定相。由于这一部分的水与滤纸纤维结合比较牢固,所以流动相既可以是与水不相混溶的有机溶剂,又可以是水混溶的有机溶剂如乙醇,丙醇,***。流动相借毛细作用在纸上展开,与固定在纸纤维上的形成两相,样品依据其在两相间的分配系数的不同而相互分离。
高效液相色谱仪型号、配置多种多样,但其基本工作原理和基本流程是相同的,主要包括高压输液系统、进样系统、色谱柱分离系统、检测器、数据处理系统等,如图1所示。
基本流程说明:流动相
(溶剂)由高压泵系统吸
入并以恒定流量输出,样
品有进样器导入,随流动
相进入色谱柱进行分离,
被分离组分油流动相携带
进入检测器,所产生的信
号经数据处理系统采集、
记录、处理,获得色谱图
和分析结果[4]。
⑴吸附色谱法
吸附色谱法是以固体吸附剂为固定相基于其对不同组分吸附能力的差异进行混合物的分离。吸附剂是一些多孔性的固体颗粒,如氧化铝、硅胶等。当混合物随流动相通过吸附剂时,在吸附剂表面组分分子和流动相分子对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附。对极性
吸附剂来讲,极性大的组分易被吸附,此时流动相分子不易被吸附(流动相分子置换能力 1
或解吸附能力弱),则组分滞留时间长,K值大,迁移速度慢,后流出色谱柱;反之,当流动相极性增