文档介绍：目的基因扩增方案和萝卜过氧化物酶rsprx1的扩增
目的基因扩增方案和萝卜过氧化物rsprx1的扩增一、实验目的
1、学会自行设计PCR反应体系和条件。 2、为萝卜过氧化物基因扩增提供依据。
3、学****并掌握PCR扩增技术的原理和基本操作。二、实验原理三、具体方案
1、配制PCR反应体系
10*缓冲液上游引物下游引物
25mmol/L Mgcl2 模板DNA
TaqDNA聚合酶重蒸去离子水
总反应体积20微升
,用手指轻弹离心管底部,混匀溶液,在台式离心机中离心2s以集中溶液于管低。 2、 PCR反应过程及条件
预变性变性复性延伸
最后一次延伸保存 94摄氏度 94摄氏度 54摄氏度 72摄氏度 72摄氏度 4摄氏度 5min 30s 30s 30s 10min
根据情况定
30个循环
四、实验步骤
1、打开PCR仪,使盖加热到一定温度,变成热盖。
2、按目的基因扩增方案进行操作。PCR仪运行了一个周期才能离开。五、实验结果
分析:
1、
对根据提供的上下游引物查得该基因为萝卜过氧化氢酶基因,全长346个碱基,gatc
83个g;81个c;82个a;100个t;。
2、,,自己提取的浓
度过高,为了和其他同学一样,。根据实验:萝卜过氧化物酶rsprx1的扩增,,。
3、根据公司提供的引物和Tm,上游引物Tm=,下游引物Tm=,退火温度
=Tm-5摄氏度。所以退火温度约为54摄氏度。
4、延伸时间,1Kb以内的需延伸1min,但该基因为346Kb,所以
30s应该可以。
5、循环次数根据模板DNA浓度定,30个循环已足够。
6、使用热盖以免加温过程中液体蒸发影响反应体积。
7、 10*,是