实验六现代免疫学检测技术.pptx

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一、实验目的
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免疫酶技术(酶免疫测定法)
免疫酶技术:将抗原抗体反应的特异性,与酶反应的敏感性相结合的一种方法。它以酶作为标记物,与抗体(或抗原,抗抗体)联结,形成酶标抗体(抗原,抗抗体),其与相应的抗原(或抗体)作用后,通过底物的颜色反应进行抗原(抗体)的定性和定量(酶标测定仪),亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究,即酶免疫组织化学技术。
目前应用最多的免疫酶技术是酶联免疫吸附实验(ELISA)。
二、实验原理
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ELISA简介
1971年瑞典学者Engvall和Perlmann,荷兰学者VanWeeman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,称为酶联免疫吸附实验(ELISA—enzyme-linkedimmunosorbentassay)
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ELISA基本的实验过程
包被:将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面,使抗原或抗体固相化。
抗原抗体反应:先后加入被检标本和酶结合物,使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定。
酶促反应:在反应体系中加入酶作用的底物,使发生酶促反应而显色。
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ELISA:根据检测目的和操作步骤不向,有以下三种类型的常用方法。
酶联免疫吸附实验
间接法
双抗夹心法
竟争法
双抗体夹心法
双抗原夹心法
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(1)包被固相抗体(室温放置,厂家完成)
(2)加入待检样品(抗原)
抗体
抗原
ELISA检测—双抗体夹心法(测抗原)
放大的反应小孔
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酶标抗体
(4)加入酶反应底物后显色
(HRP酶与底物反应后,显兰色)
底物
(3)加入酶标抗体试剂
(夹心饼干形成!)
ELISA检测—双抗体夹心法(测抗原)
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ELISA检测—双抗原夹心法(测抗体)
与双抗体夹心法区别:
(1)包被抗原
(2)检测样品待测抗体,如血清等。
(3)酶标抗原
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酶标板
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